核桃叶片总 RNA 提取方法的比较研究.pdf

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1、山东农业科学2014,46(2):11l2,l6ShandongAgriculturalSciences核桃叶片总RNA提取方法的比较研究陈新,刘洪对,贾建云,徐丽,张力思,刘庆忠(1.山东省果树研究所/山东省果树生物技术育种重点实验室,山东泰安271000;。2.山东省农业科学院国际合作处,山东济南250100)摘要:通过对比Trizol、EASYspin和Qiagen3种试剂盒提取方法,探讨适合核桃叶片总RNA提取的有效方法。结果表明EASYspin试剂盒提取的RNA纯度较高、完整性好,试验用时较短

2、,且试剂盒成本较低。关键词:核桃;总RNA;Trizol;EASYspin;Qiagen中图分类号:Q522文献标识号:A文章编号:lOOl-4942(2014)02-0011-03ComparativeStudyonIsolationMethodsofRNAfromWalnutLeavesChenXin。,LiuHongdui,JiaJianyun,XuLi,ZhangLisi,LiuQingzhong(1.ShandongInstituteofPomology/ShandongProvincialK

3、eyLaboratoryofFruitTreeBiotechnologyBreeding,Taian271000,China;2.DepartmentofInternationalCooperation,ShandongAcademyofAgriculturalSciences,.n0n250100,China)AbstractThreemethodsofTrizol,EASYspinRN09andQiagenwerecomparedinthispapertofindouttheeffectivemet

4、hodtoextracttotalRNAfromwalnutleaves.TheresultsshowedthattheRNAextractedwi山EASYspinRN09kithadthehigherpurityandgoodintegrality,andthismethodsavedtimeandcost.KeywordsJuglansregiaL.;TotalRNA;Trizol;EASYspinRN09;Qiagen核桃(JuglansregiaL.)是我国重要的干果来越高,因此,有必要筛选理

5、想的提取方法。树种,栽培历史悠久,分布广泛。目前,我国核桃本研究用Trizol、EASYspin和Qiagen3种试的栽培面积和产量均居世界第一位j。RNA提剂盒提取核桃叶片总RNA,通过对RNA纯度和取是分子生物学研究的基础,也是试验成败的关完整性的比较,筛选最适合核桃叶片总RNA提取键。关于植物RNA提取的方法很多,但由于不同的方法,为今后核桃的分子生物学试验奠定基础。植物材料细胞中次生代谢产物的种类、含量不同,1材料与方法适合的提取方法也不相同。核桃组织中富含多糖多酚等物质。酚类化合物在匀浆时极易

6、被氧化成1.1试验材料醌类物质,与RNA产生不可逆的结合,从而影响本试验所用材料采自国家果树种质泰安核桃RNA的分离纯化j。多糖的许多理化性质与板栗资源圃,随机从树的不同方位挑取生长发育RNA相似,在提取过程中易与RNA形成共沉正常的幼叶,立即液氮速冻,于一70~C超低温冰箱淀_3j,且后期很难将其分离开,对RNA的分离和中保存备用。纯化造成很大的干扰。若RNA提取方法不当,会1.2试剂与耗材导致RNA埋在多糖形成的粘稠胶状物中难于溶Trizol、EASYspinRN09与Qiagen3种试剂盒解、分离

7、,严重影响后续试验的稳定性。随着核桃分别购自北京全式金生物技术有限公司、北京艾研究的不断深入,对核桃总RNA质量的要求也越德莱(Aidlab)生物科技有限公司和德国凯杰公收稿日期:2013一lO—O8基金项目:科技部科技基础性工作资助项目“国家核桃板栗种质资源平台”(2013—048);农业部作物种质资源保护项目(2014NWB009);山东省农业良种工程项目[鲁科农字(2011—086)]作者简介:陈新,博士,助理研究员,主要研究方向为果树种质资源及分子生物学。E—mail:63249324@qq.o

8、om通讯作者:刘庆忠,男,研究员,研究方向:果树种质资源与生物技术育种。E—mail:qzliu001@126.tom12山东农业科学第46卷司。试验所用器皿用0.1%DEPC水处理24h以2.23种方法提取总RNA纯度和产率的比较上,然后高温灭菌;研钵、玻璃器皿等在180℃高3种方法获得的RNA用紫外分光光度计检温烘烤12h以上,备用。测,结果(表1)显示:Trizol试剂盒法提取的RNA1.3试验方法0D猢/OD珈为1.350,说明其中

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