甘草rna提取方法研究

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1、甘草RNA提取方法研究【摘要】　　目的从甘草不同组织中提取高质量的RNA，为进一步合成双链cDNA，构建甘草cDNA文库奠定基础。方法采用几种常用方法(高盐溶液法、LiCl沉淀法、CTAB法和SDS法)提取甘草不同组织的RNA，并以1%琼脂糖凝胶电泳和A260/A280，A260/A230的值作为指标。结果LiCl沉淀法对于甘草不同组织中的RNA具有更好的提取效果，条带清晰，完整性较好，且A260/A280和A260/A230值均接近于2.0，根部组织产量达0.220μg/mg，叶片组织产量达0.275μg

2、/mg。结论采用LiCl沉淀法提取甘草不同组织中的RNA具有更好的效果，适于从富含多糖的植物组织中提取RNA。【关键词】甘草RNA提取多糖　　Abstract:ObjectiveToisolatethehighqualityRNAfromdifferenttissuesofRadixGlycyrrhizaeefficientlysoastolayafoundationtosynthesizethecDNAandconstructthecDNAlibrary.MethodsTotalRNAdifferentt

3、issuesofRadixGlycyrrhizaebysomefamiliarchloridesedimentation,CTABandSDS.Use1%agarosegelelectrophoresisandUVnumericalvalueofA260/A280andA260/A230asthestandard.ResultsThemethodoflithiumchloridesedimentationhadthebesteffecttoextracttotalRNAfromdifferenttissue

4、s,thebandsgfreshgfreshethodoflithiumchloridesedimentationhasthebesteffecttoextracttotalRNAofdifferenttissues,andthismethodisalsoapplicabletotheplantsuchamylase.　　Keyylase　　甘草(RadixGlycyrrhizae)是一种富含多糖的中药材，临床应用广泛。随着甘草分子研究的不断深入，探索快速而有效的RNA提取方法，从甘草不同组织中获得高质量的

5、RNA成为了研究的关键，也为进一步的研究如构建cDNA文库，RT-PCR，Northern杂交、基因芯片等奠定基础。有关植物RNA的提取方法已有不少报道［1］，但由于植物组织具有多样性，在实际应用中需要摸索出适应自身研究的植物材料的RNA提取方法。　　本实验通过对比高盐溶液法、LiCl沉淀法等4种常用的植物RNA提取方法，对甘草不同组织的RNA进行分离研究，从而找到高效、简便、适用于甘草不同组织的RNA提取方法。　　1材料与方法　　1.1材料一年生甘草的叶片和根部组织。用0.1%生理盐水洗净，用干净吸水纸擦

6、干，分成1g/份存于离心管中，于液氮中迅速冻存，然后转入-70℃冰箱保存。　　1.2方法　　1.2.1高盐溶液法分别取叶片和根组织各1g，放入研钵中，加入液氮研磨成细粉，加入10ml的抽提缓冲液（100mmol/LTris-HCl(pH9.5)，10mmol/LEDTA(pH8.0)，4mol/L异硫氰酸胍，5%的β-巯基乙醇，2%PVP），静置，待抽提缓冲液缓慢融化，用力研磨，直至分散混匀，分装在4个10ml离心管中。12000g离心5min，取上清液，加入1ml氯仿，混匀，12000g离心10min。取

7、上清液，加入等体积的异丙醇和等体积的高盐溶液（1.2mol/LNaCl，0.8mol/L柠檬酸三钠），静置10min12000g离心30min，弃去上清，沉淀用75%乙醇洗涤，自然干燥，用50μl无RNase水溶解，-70℃保存。　　1.2.2LiCl沉淀法分别取叶片和根组织各1g，放入研钵中，加入液氮研磨成细粉，转入4个10ml的离心管，分别加入3ml抽提缓冲液（0.75mol/L柠檬酸钠溶液(pH7.0)，10%(m/V)N-月桂肌氨酸钠溶液，100mmol/LTris-HCl(pH9.5)，10mmo

8、l/LEDTA(pH8.0)，4mol/L异硫氰酸胍，5%β-巯基乙醇，2%PVP），混匀，冰浴30min，23000g离心20min。吸取上清液，依次加入0.4ml2mol/LNaCl，4ml苯酚，0.8ml氯仿:异戊醇(49:1)，混匀，冰浴15min，23000g离心20min。取上清液，加入等量的KAc溶液，冰浴30min，23000g离心20min。吸取上清液，加入0.6倍体积的异丙醇，-20℃放置45