动物组织中总DNA的提取

《动物组织中总DNA的提取》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实验十动物组织中总DNA的提取TotalDNAextractionfromeukaryotictissue实验目的了解真核生物基因组DNA提取的一般原理通过动物组织DNA的提取，掌握DNA提取的方法和步骤高等动物、植物的基因组相当宠大，如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，获得纯度高、基因组相对完整的基因组是以后PCR分析，基因文库的构建，基因探测等的研究的基础。动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出ＤＮＡ

2、。DNA提取原则保证DNA结构的完整性纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质排除有机溶剂和金属离子的污染蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度排除其他核酸分子的污染实验原理细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA）称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为CTAB法和SDS法（表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来）。SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋

3、白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即DNA溶液。SDS法提取动物组织DNA试剂提取缓冲液：200mmol/LTris·Cl(pH8.0),25mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,0.5%SDS24：1的氯仿：异戊醇预冷无水乙醇SDS抽提液配方(1000ml):操作步骤肝脏1g左右,(剪碎)置研钵中，加入2-3mL提

4、取缓冲液，研磨成浆；吸入10mLEP管中，摇动混匀；60℃水浴保温20min，不时颠倒混匀；室温下3000rpm离心10min；小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀；室温下3000rpm离心10min；小心将上层水相吸入另一只离心管中；重复4-5步2-3次;(此步不做）加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。结果分析与讨论