实验四 动物血液中dna的提取-教案

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1、授课教师常祖明学生人数55课题血液基因组DNA的提取授课类型新授课授课方法讲授、演示教学用具多媒体、实验室设备教学目的掌握鸡血DNA提取的原理及方法教学重点理解实验过程中每一步操作的目的及原理教学难点教学过程一、实验目的1.掌握鸡血DNA提取的原理；2.掌握鸡血DNA提取的方法及操作过程。二、实验原理哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸

2、水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。三、实验仪器1.水浴锅：55℃2.离心机：8000转、12000转3.离心管：5ml（120个）4.移液枪：10μl、680μl、700μl、800μl、900μl、1ml5.容量瓶：100ml6.取血针及管四、实验材料及药品实验材料：普通家鸡：需血液4.08ml（每管136ml）1.无水乙醇作用：DNA沉淀剂、洗涤剂。商品信息：瓶/500ml，分析纯AR。理化性质：无色澄清液体。有灼烧味。易流动。极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。储存：储存于阴凉、

3、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封。应与氧化剂、酸类、碱金属、胺类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。危害：易燃，具刺激性。蒸气与空气能形成爆炸性混合物，爆炸极限3.5%～18.0%（体积）。2.柠檬酸作用：ACD抗凝血剂成分之一。在抗凝剂中，中和柠檬酸钠的碱性。商品信息：分析纯AR，白色塑料瓶/500g，理化性质：无臭，有很强的酸味，白色粉末或颗粒，易溶于水和醇。在潮湿的空气中微有潮解性。储存：在湿空气中有轻微潮解，需阴凉密封干燥保存。危害：柠檬酸浓溶液对黏膜有刺激作用。柠檬酸可燃。粉体与空气可形成

4、爆炸性混合物，遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。3.柠檬酸钠作用：ACD抗凝血剂成分之一。能与血液中的钙离子结合成螯合物，而使钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。商品信息：柠檬酸三钠分析纯500克/瓶。理化性质：有机化合物，外观为白色到无色晶体。无臭,有清凉咸辣味。常温及空气中稳定,在湿空气中微有溶解性,在热空气中产生风化现象。加热至150℃失去结晶水。易溶于水、可溶于甘油、难溶于醇类及其他有机溶剂，过热分解，在潮湿的环境中微有潮解，在热空气中微有风化，其溶液pH值约为8。储存： 常温密闭保存危害：无毒4.尿素作用：禽血裂解液成分之一。尿素能非常有效地使蛋

5、白质变性，尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。商品信息：化学试剂分析纯500克/瓶（塑料瓶装）理化性质：无色柱状结晶或白色结晶性粉末，溶于水，乙醇和苯，难溶于乙醚，不溶于氯仿。储存：密封避光保存。危害：避免与皮肤和眼睛接触。5.十二烷基硫酸钠(SDS)作用：禽血裂解液成分之一。裂解核酸-蛋白质复合体，用于从蛋白质中分离核酸。商品信息：500g/分析纯AR。理化性质：白色或淡黄色粉末。溶解性：溶于水，呈透明溶液，溶液呈中性。易溶于热水，溶于水，溶于热乙醇，微溶于醇，不溶于氯仿、醚。储存：密封阴凉干燥保存 防止受潮受热危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用

6、。可引起呼吸系统过敏性反应。该品可燃，具刺激性，具致敏性。遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体。6.1MTris-HCl(PH8.0)缓冲液作用：禽血裂解液成分之一。提供一个缓冲环境，防止DNA被破坏商品信息：瓶/100ml，无色、澄清溶液理化性质：Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷，瓶/500g。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。储存：室温保存。危害：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。7.乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）作用：配制0.5MEDTA（PH8.0）溶液。螯合Mg2+或

7、Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。商品信息：瓶/250g。理化性质：无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状粉末。溶于水，不溶于乙醇、乙醚，其水溶液pH值约为5.3。可由EDTA与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。储存：于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用。对眼睛、皮肤有刺激作用。本品可燃，具刺激性。8.蛋白酶K（共需300μl，每管1