实验四动物血液基因组DNA的提取.ppt

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1、动物基因组DNA的提取常祖明背景知识动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？与植物细胞的差别？背景知识DNA的存在形式背景知识DNA的存在形式背景知识DNA的存在形式背景知识DNA的存在形式核苷酸双螺旋结构一级结构-核小体二级机构-螺线管三级结构-超螺旋管四级机构-染色体+组蛋白DNA为白色类似石棉样的纤维状物，大都呈酸味。DNA是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。DNA的理化性质实验目的掌握CTAB法提取植物DN

2、A的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意：此方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。实验原理哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。实验原理固定血样采集抗凝血裂解

3、细胞蛋白质降解蛋白质变性沉淀DNA洗涤去杂质普通家鸡无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、1MTris-HCl(PH8.0)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿(三氯甲烷)、异戊醇实验材料实验仪器取血针及管离心机：3台/12管离心管：水浴锅：65℃移液枪（包括枪头）实验试剂1.75%的乙醇2.ACD抗凝剂100ml（共需48ml，每管0.8ml）3.禽血裂解液100ml（共需51ml，每管1.7ml）4.氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每

4、管1.8ml5.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml6.TE缓冲液PH8.050ml实验步骤75%乙醇20ml翅下取血5ml5ml离心管800ulACD抗凝剂800ulACD抗凝剂8000转离心1分钟弃上清液8000转离心1分钟弃上清液取680ul8000转离心1分钟55℃水浴过夜1700ul裂解液10ul蛋白酶K实验步骤2ml饱和酚摇匀至无块状12000转离心10分钟DNA酚蛋白层5ml离心管取上层透明的DNA溶液2ml酚-氯仿-异戊醇12000转离心10分钟5ml离心管取上层DN

5、A液1.8ml氯仿-异戊醇12000转离心10分钟5ml离心管取上层DNA液无水乙醇75%无水乙醇1000ulTE缓冲液晾干-20℃保存在整个实验过程中应严格执行无菌操作；部分药品有毒，操作中应注意安全防护；刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！再每一次加入药剂后，都要轻轻晃动离心管，使之混匀。注意事项思考题本实验中用到的各种试剂的作用是什么？本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？实验安排按照学号分组进行实验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。6人一

6、组2013级生物技术专业分子生物学实验报告姓名：学号：实验项目：实验四动物血液基因组DNA的提取1.实验目的2.实验原理3.实验试剂4.实验步骤5.实验注意事项6.思考题实验报告