哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告

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1、实验序号五实验名称哺乳动物组织基因组DNA提取（GenomicDNAExtractionfromMammalTissue）实验时间2012-5-10实验室生物综合实验室I一、实验目的(ExperimentalPurpose)Aftertheexperimentdone,studentsshouldbeabletoknowhowtoextractgenomicDNAfrommammaltissue,andtorunanagarosegel.1.掌握动物基因组DNA提取的操作方法。2.掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法二、实验原理(Experimental

2、Principle)Intheproceduredescribedhere,thedetergentsSDS(sodiumdodecylsulfate)areaddedtodenatureproteinsandsolubilizelipidsinmembranesleadingtocelllysis.ThecelllysateisoftentreatedwithenzymesthathydrolyzeRNAandproteins.本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶K

3、和蛋白进行水解处理。Thisisgenerallyfollowedbyphenolofphenol:chloroformextractiontoremovetheremainingproteins,whichwilleitherentertheorganicphaseor,ifdenatured,appearattheinterphase.Chloroformtreatmentisusedtoremovethephenol,andalcoholprecipitationconcentratestheDNAwhileremovingnucleotid

4、es,aminoacids,andlow-molecular-weightoligonucleotidesandpeptides.1随后用酚︰氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。氯仿处理是为了去除苯酚，而乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。Asafurtherprecaution,ethylenediaminetetraace-ticacid(EDTA)isinclude-edinthebufferstochelateMg2+.Thiswi

5、llreducedeoxyribonuclease(DNase)activitybecauseoftheMg2+requirementoftheseenzymes.为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。TheprotocoldescribedhereresultinDNAthatiseasilycutwithrestrictionenzymesand,therefore,isusefulforSouth

6、ernHybridizationstudies.IftheDNAistobeusedtoconstructaclonebank,highermolecularweightDNAisdesirable,sothevortexstepshouldbeeliminated.本实验方法分离得到的染色体DNA样品易被限制酶切割，因此，较适用于Southern杂交的研究。如果所制备的基因组DNA是用于构建克隆文库，要求得到较大分子量的DNA，则必须省略其中的振荡步骤。1三、试剂与器材（Reagentsandapparatus）Ⅰ.InstrumentsHigh

7、speedrefrigeratedcentrifuge（高速冷冻离心机）、Glasshomogenizer（玻璃匀浆器）、ElectrophoresisSystem（电泳系统）、Ultraviolettransilluminator（紫外透射仪）、Ultracoldstoragefreezer（超低温冰箱）、Autoclave（高压灭菌锅）、Pipettes（微量加样器）、Electronicbalance（电子天平）、Acidometer（酸度计）Ⅱ.MaterialLiverofmiceⅢ.ReagentsTris、SDS、EDTA、HCl、N

8、aOH、Sodiumacetate、Aceticacid、Phenol、Chloroform、Ethanol、Isoamy