哺乳动物组织基因组dna提取

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1、本科学生实验报告姓名陈明辉学院生命科学学院专业生物科学班级08级A班实验课程名称分子生物学指导教师及职称倪娟老师开课时间2010至2011学年下学期云南师范大学教务处编印7实验名称：哺乳动物组织基因组DNA提取GenomicDNAExtractionfromMammalTissue实验时间：2011-5-24小组合作：是○否○一、实验预习1、实验目的：(1)掌握动物基因组DNA提取的操作方法;(2)掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。ExperimentalPurpose：Aftertheexperimentisfinished,studentss

2、houldbeabletoextractgenomicDNAfrommammaltissue,andtorunanagarosegel.2、实验设备及材料：Reagentsandapparatus（1）Instruments：Highspeedrefrigeratedcentrifuge（高速冷冻离心机）、Glasshomogenizer（玻璃匀浆器）、ElectrophoresisSystem（电泳系统）、Ultraviolettransilluminator（紫外透射仪）、Ultracoldstoragefreezer（超低温冰箱）、Aut

3、oclave（高压灭菌锅）、Pipettes（微量加样器）、Electronicbalance（电子天平）、Acidometer（酸度计）（2）Material：Liverofrabbite（3）Reagents：Tris、SDS、EDTA、HCl、NaOH、Sodiumacetate(NaAc)、Aceticacid(HAc)、Phenol、Chloroform、Ethanol、Isoamylol、TEbuffer、ProteaseK、RNaseA、Agarose、DNAmolecularweightmarkers、Boricacid、Sug

4、ar、Bromophenolblue、Fluorescentdye(Gelview)73、实验原理及实验流程或装置示意图：实验原理：（1）本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶K进行水解处理。（2）随后用酚:氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。（3）为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(ED

5、TA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。ExperimentalPrinciple:（1）ThedetergentsSDS(sodiumdodecylsulfate)isaddedtodenatureproteinsandsolubilizelipidsinmembranesleadingtocelllysis.ThecelllysateisoftentreatedwithenzymesthathydrolyzeRNAandproteins.（2）Thentheyaretr

6、eatedwithphenolandchloroformtoremovetheremainingproteins,whichwilleitherentertheorganicphaseor,iftheyhaddenatured,appearattheinterphase.AlcoholhelptoconcentratetheDNAwhileremovingnucleotides,aminoacids,oligonucleotidesandpeptides.（3）Wecanaddtheeathylenediaminetetraaceticacid

7、(EDTA)tokeeptheintegrityofDNA.EDTAcanchelateMg2+andreducedeoxyribonuclease(DNase)activity,becausetheseenzymesrequireMg2+towork.本实验方法分离得到的染色体DNA长度为100-150kb，适用于构建基因组文库和Southern杂交分析。如果要求得到较大分子量的DNA，则必须省略其中的振荡步骤。试验流程1、冰浴处理生理盐水酶解液配制工作液称取0.2g肝脏（冰冷的生理盐玻璃匀浆器组织匀浆液水清洗（3次））剪碎（2ml匀浆液）玻

8、璃匀浆器匀浆移至1.5ml离心管离心（4℃5000r／min30—60s）弃上清加400ul无菌水吹散加400ul酶解液水浴处理（55℃、12—18h