实验一植物基因组DNA的提取.ppt

《实验一植物基因组DNA的提取.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验一植物基因组DNA的提取一、实验目的：1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。2.掌握DNA提取的方法和步骤。二、一般原理提取DNA的一般原理，是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。三、材料玉米叶片四、设备移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5mL离心管。五、试剂提取缓冲液：100mmol/LTris·Cl，20mmol/LEDTA，500mmol/LNaCl，1.5%SDS。氯仿：异戊

2、醇：乙醇（80：4：16）。TE缓冲液：10mmol/LTris·Cl（pH8.0），1mmol/LEDTA（pH8.0）。其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，3mol/LNaAc（pH5.2）。六、操作步骤在7ml离心管中加入2ml提取缓冲液，60℃水浴预热。取玉米幼叶0.5g，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，摇动混匀，60℃水浴保温30~60min（时间长，DNA产量高），不时摇动。加入2ml氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）溶液，颠倒混匀（需带手套，防止损伤皮肤），室温下静置5~10min，使水相和有

3、机相分层。室温下5000rpm离心5min。小心移取上清液至另一7ml离心管，加入等体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净的吸水纸上吸干，放入含200μlTE的离心管中。若絮团太少，亦可直接室温下5000rpm离心5min，去除上清液，再加入200μlTE溶解沉淀。加入1μlRNaseA(10μg/μl)，37℃水浴保温10min,除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤)。加入1/10体积（约20μl）的3mol/LNaAc及二倍体积（约400μl）预冷的无水乙

4、醇，混匀，-20℃放置20min左右。室温下5000rpm离心5min。去上清，用1ml70%乙醇漂洗沉淀二次，待沉淀干燥后，重新加入200μlTE溶解，-20℃贮存,备用。DNA的紫外分光光度计检测原理：核酸在260nm处有最大吸收峰蛋白质在280nm处有最大吸收峰盐和小分子在230nm处有最大吸收峰OD260/OD280>1.7OD260/OD230>2.01OD260=50μg/mLDNA思考题:1.为什么构建DNA文库时,一定要用大分子DNA？2.如何检测和保证DNA的质量？