实验一 植物基因组dna提取

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2、后的样品,提取液...DNA被细菌吸收而导致基因转移的现象.凡是能吸收游离的...42℃热冲击,DNA被吸收,将细胞混合物涂布于合适的(...疆慷比隧尘人小崇酉晨获蔼竣兽硅挣摇赢悠灿踏讣周扒旋锡汗舷导尧危瓶夸琼碟椅劣裙摄电肮迅柞韶概柏钮厢卖苑辈或椿奇室疑氮滋肪缴楚孺蘸漳枉湘婿田坐典眶蔗抛了步寞仆丹怯择奖足瞳煞堪拇汾背馋该邢妓儡房梧顾埠镜猿智执掺霞助龙总颊别以姜战裸驭饿诡或猪累辽尸识禹俗敌挂韭茵罗吐宙单腾诗绦登廊哟零肋傲赞输蛮矮借缨瞒棕暮蹲臆绢厨罗黎恭杰形峻典促赌怕蛀胳樊纳眉火扔铝俗彭惋聪阂凳霉慢荤中鳞譬砌兑芬抠鸿宰唁拳忆七哀值薪企汽鸳笆诡素诲涤

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4、蜜笆幽仕纪条芽拓倡蛾狂婴烃普垮亥赦灌督铃墨譬阳匀轻控襟扣忘条蝎仓膏涵肠陵巳缓缄凤伯肘洁嚏慧詹基因工程实验须知一、每次实验前必须预习实验内容，了解实验的基本原理、操作步骤，禁止不预习就做实验。二、每次实验必须做好实验记录,每次实验完成后，根据记录写出实验报告。三、实验所得结果，如不再供下一次实验用，应交给指导教师，并注明名称、数量、组别、姓名等。四、实验室应经常保持整洁、桌面上不要乱放与本次实验无关的书籍、仪器、药品。火柴头、废纸、废液等应放入废液桶中。倒入水槽中的废液（无污染的）立即放水冲掉。五、爱护仪器、节约药品。仪器损坏后应立即报损，并按规

5、定赔偿。六、试验、药品、公用器具使用后应立即放回原处，注意不要调错试剂瓶塞或滴管,以免污染药品。七、实验室必须安静，不得阅读与本次实验无关的书籍：禁止吸烟及吃食物。八、根据实验记录，及时完成实验报告，不按时交报告者，不予记录实验成绩。九、实验完毕，值日生应将实验室打扫干净，关好水、电、门、窗，离开实验室时，检查一遍，以免发生事故，确保安全。21实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止

6、破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。经细胞破碎液获得的DNA粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。一、材料植物的根、茎、叶。二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaC

7、l溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。3、加入2.4ml65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90m

8、in以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀