Trizol法提取总RNA(细胞和组织).doc

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1、Trizol法提取总RNA1、①提取组织RNA时，研钵高温高压灭菌，每50-100mg组织液氮研磨后，将粉末用液氮预冷的药匙转移至预先装有1mlTrizol的EP管中，充分混匀（粉末总体积不能超过Trizol体积的10%）用1mlTrizol试剂裂解；②提取细胞RNA时，每5-10×106个细胞用1mlTrizol裂解，反复吹打或剧烈振荡；2、将上述裂解液，室温15-30℃静置5min；3、每1mlTrizol加入0.2ml氯仿，在手中用力振荡15s，室温放置2-3min后，12000r离心15

2、min（2-8℃）；4、取上层水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加入0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，室温放置10min，12000r离心10min（2-8℃），弃上清；5、向沉淀中按每1mlTrizol加1ml75%乙醇（4℃），涡旋混合，进行洗涤，7500r离心5min（2-8℃）,弃上清；6、将RNA沉淀在室温下自然干燥（5-10min）；7、用30μlRNase-freewater溶解RNA沉淀；8、取出1μl，稀释10倍，测定RNA浓度并记录；9、进行反转录或分装保存于-80℃