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时间:2020-12-18
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1、Trizol法提取细胞总蛋白1.提取细胞总RNA吸去上清后,按0.3ml乙醇/1mlTrizol加入中间层和下层有机相,混匀,室温静置3min;2.4℃,2000rpm,离心5min,取上清转移至新的EP管中(约0.8ml);3.加入1.5ml异丙醇沉淀蛋白质,室温放置10min;4.4℃,12000rpm,离心10min,弃上清;5.用2ml含有0.3mol/L盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀,室温放置20min,4℃,7500rpm离心5min;重复洗涤三次;6.无水乙醇洗涤一次沉淀,室温放置20min;7.4℃,7500rpm,离心5min;8.真空干燥沉淀,加入适量l%SDS,55℃
2、振荡溶解3h;9.不溶物再以4℃,10000rpm离心10min,取上清即为细胞总蛋白溶液,分装后于-80℃保存待用。全程大约需配制试剂0.3M盐酸胍95%乙醇溶液:2.866g盐酸胍,加100ml95%乙醇。1%SDS溶液:1gSDS溶解于100ml去离子水。
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