【精品】细胞培养技术.doc

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1、-X细胞培养基本概念细胞培养是持从体内组织取出细胞幕拟体内出现环如在无菌、适为温度及酸减度和-定营养条件下.使期生K緊殖•并维持其结构和功能的•种培养技术。细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。在医学遗传学研究中应用垠广泛的是外周血禅巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析屮便川最广泛。体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化,成为水久细胞系，也可直接建成永久细胞系，氷久细胞系能在体外无取制的传代和生K.永久细胞系通常貝有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特征“但细胞克隆的细胞

2、系其这一特征可以不明显“二、细胞培养的环境细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。1、无污染环境培养环境无壽和无菌是保讦细胞生存的首要条件。当细胞放迓于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有铐物的防御能力•一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养屮，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时淸除箒是维持细胞生存的基本条件。2、恒定的温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为365C±05C,倫离这汨度范I如细胞的iE常•代谢会受到彫叹甚至死亡。培养细胞对低沿的的戈力较对鬲温强.温度上升不超过39£时・细胞代谢与温度成iE比：人f4

3、；细胞在39-40*C1小时，即能受到一定损伤•但仍有可能恢复：在40-41r1小时.细胞会背遍戈到损伤，仅小半数有可能恢复：41-42C1小时.细胞戈到严垂损伤•大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复可能：当泪度在43C以上1小时，细胞全部死亡。3、气体环境气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳•氧气参与三找酸循环，产生供给细胞生长増殖的能址和合成细胞生长所需川的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境叽二氧化滋既足细胞代谢产物•也足细胞生长繁殖所需成分•它在细胞陪养中的主要作川在于维持培养基的PH值。大多数细胞的适宜PH为727.4

4、・偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响“但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长❾有资料显示,原代羊水细胞培养PH6.8时眾适"细胞培养液PH浓度的调节城常用的为加NaHCO3的方法.因为NaHCO3可供CO2,但二氧易于逸曲故最适用于封闭培养，而逐乙基哌噪乙硫碰酸

5、基和液体培养基两类：按比來源分为合成培养基和犬然培养慕。（1）合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数屋严格配制而成的。内含碳水化合物、纭基酸、脂类、无机盐、维生索、微送无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。（2〉天然培养嵌：使用眾普遍的天然培养基是血胡.基木以小丫血浒眾普遍。血淸由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及英多活性物质。与合志培养基合用.能便细胞硕利增殖生长。常见使川最为5-20%.三、细胞培养设施和基本条件1、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因索的彫臥细胞培养室和设计原则是防止微

6、生物污染和有害因累影吭，要求工作环境淸沽、空气淸新，•干燥和无烟尘。细胞培养工作包拈：工作液配制、无菌操作（采样）、温育、无菌处理，细胞和川品贮存等.细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室.2、常川设施及设备（1）超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、宜流式和外流式三大类。<2）无菌操作间：一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成•操作间放程挣化工作台及二氣化廉培养箱、离心机、倒程显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消髯好的无菌物品等“<3）操作何：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、曹通尺平及日常分析处理物品・（

7、4）洗刷消毒间:烤箱、消毒谓、蒸慵水处理器及酸紅等。<5）分析间：显微镜.计算机及打印机峯3、培养器皿细胞培养以玻璃器JHI为主，常准备域需是便用最的三倍。器皿应选择透明度好、无鸯、中性駛度玻璃制I仏常用的玻璃器皿有下而儿种。（1）液体储存瓶：川于昭存各种配制好的培养液、血淸等液体，常以500mk250mk100ml生理盐水瓶或血浆瓶代枠。<2）培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养甌的形态各异，川于细胞传代培养的细胞耍求瓶型厚簿均匀，便于细胞贴