[精品]原代细胞培养操作.doc

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1、原代细胞培养操作取材:2.3.4.用另一无菌的剪刀和银子切开腹部，取出含有胚胎的子用簸缈位左使孕鼠迅速死亡O把整个孕鼠浸入盛有75%乙輕的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。用无菌的银子和剪子在前腿下作一履做水严勿口，用无菌银子将皮肤扯向后腿。宫，置于无菌的培养皿上。5.剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将[=1胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。切割（2人一组）:6.7.将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎

2、，直到成lmn?8.左右的小块，再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。消化、接种培养（2人一组入9.视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液（约3ml）,37°C中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次。10.静置，吸去上清，加2ml细胞生长液，用吸管反复吹打组织块，使细胞分离，静置，使未分散的组织块下沉。11.取部分细胞悬液接种至加了细胞生长液（约3ml）的培养瓶中（若计数，按每细胞瓶1XIO，'细胞的数量接种），置于37°C,二氧化碳培养箱中培养。培养3〜5天观察结果。