PriCells原代细胞培养技术指南.doc

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1、PriCells原代细胞培养技术指南2012版武汉原生原代生物医药科技有限公司Atm1、收到活细胞的第一天，怎样操作，哪几个步骤？（1）收到细胞后，检查是否有运输问题，即原代细胞培养瓶或管是否破损，原代细胞培养液是否溢出。（2）若没有运输问题，请75%洒精消壽后，拆下封口膜，放入细胞培养箱中静（3）严格检查培养箱的参数。（4）原代细胞静置时间一般为24小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。（5）选用正确的原代细胞培养体系。（6）培养的前三天，要求每日至少3-5张细胞照片。2、收到原代细胞后，如何初步判断细胞是否良好？（1）收到冻存的原代细胞复苏后，第2天原代细胞贴壁良好，换液；第4—5

2、天原代细胞基本上可置80-90%（T25-Flask）o（2）收到存活的原代细胞细胞后，需静置培养24小时，保留5-8ml原代细胞培养液；第2天换液；第4—5天原代细胞基本上可置80-90%（T25—Flask）。3、收到存活的原代细胞瓶内的原代细胞培养液可以继续使用吗?（1）无菌操作下吸出可以继续使用。（2）4。（3保存。4、原代细胞培养时，瓶内少量漂浮物是什么？有漂浮物就证明存在污染吗?（1）原代细胞培养时，会有些漂浮物。（2）漂浮物一般是死细胞或细胞的代谢产物，原代细胞培养时有少量漂浮物,属正常情况。（3）原代细胞培养污染时，培养液变浑浊。5、原代细胞培养细胞不贴壁，是否细胞死亡吗?

3、(1)有些原代细胞是非贴壁生长。(2)刚收到的存活的原代细胞时，因为运输途中的颠簸，原代细胞会出现不贴壁，需静直培养24小时。6、为什么说原代细胞培养消化步骤很关键？有哪几个要点？因为消化需要用到映酶，J］夷酶对细胞是有伤害的。消化时要严格控制消化时间,不可以过长，一般1・2或2-3分钟(经验非常重要)，观察到细胞变圆而非完全脱落，即可拍打瓶壁使其脱落，然后终止消化。7、原代细胞培养大致几天需要换液，几天可传代？以何为标准？(1)-般2・3天换一次液，以培养液的颜色为标准，一般变黄后就需换液。(2)前期34天传一次代，后期4・6天传二次代。(前期指前三代，后期指二代后)8、原代细胞培养过程

4、中，从哪几个方面可以判断细胞好坏？(1)细胞生长速度：一分二Z后，3—4天可以长满，细胞状态则较好。(2)细胞形态：形态统一，没有老化现象。9、如何防止原代细胞在培养过程中的污染？(1)细胞培养室非同普通实验室，最好10万级。(2)严格的无菌操作。(3)不要与他人混用实验试剂和工具。(4)细胞培养箱中不要放有具他细胞培养。1（）、原代细胞培养的大致传代规律是什么？所有原代细胞都能传到第1（）代吗?（1）原代细胞因品种不同传代次数不一样。（2）不是所有的原代细胞都能传到10代，大部分原代细胞能传到6-8代。（3）有经验的技术人员，原代细胞能传代次数增加。11、为何建议客户选购存活细胞？活细胞

5、运输的优点?（1）因为收货后即可使用，不用担心因为复苏不好造成细胞状态欠佳（2）因运输需要，培养瓶中灌满的培养体系是可以再使用的。如果不需耍传太多代，则可直接购买活细胞不用单独再买培养体系，可节约经费。12、原代细胞培养过程中，选用PriCells培养体系，还需要添加其他培养产品吗？不需耍。如特殊需，我公司技术人员会提前告Z。13、PriCells原代细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？为什么？（1）客户造成细胞污染，不重发。（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发。（3）非PriCells原代细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发。（4）细胞状态不好，未提供原代细胞培养前3天照片的，不

6、重发。（5）原代细胞培养时经其它处理的，不重发。（6）PriCells原代细胞收到7天内，未告知，不重发。（7）视具体情况而定。14、原代细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？（1）原代细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发。（2）冻存的原代细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发。（3）存活的原代细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发。（4）冻存的原代细胞复苏后或存活的原代细胞静置24小时后，岀现污染，重发。（5）视具体情况而定。=LI1、如何保持CO2培养箱中水盘的清洁？CC）2培养箱内底部一般配有一个水盘，用以维持CC）2培养箱内的湿度。水盘内的水要定

7、期更换和添加，水盘也要定期清洗以避免微生物的生长。为了减少微生物的污染，有一些CO2培养箱提供灭菌功能。有的可以加热到比较高的温度来灭菌,有的则通过让空气循环通过一个紫外线腔体的办法来灭菌，这样就灭菌时就不需要中断细胞的培养。PriCtlls建议:请在您的CO?培养箱门上注明三条：（1）某专人定期更换。（2）每两周内必须更换一次，要有记录。（3）用无菌蒸傭水或无菌去离子水。2、为什么放置在4弋冰箱中的原代细胞培养基会发生