【精品】细胞培养技术教研室修改版.doc

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1、实验一实验准备工作—、器材与药品（每实验室准备量）（一）普通器材名称数量备注普通人平1台大酒精瓶3个最筒lOOOmK250ml各一只500ml盐水瓶1个玻璃棒2支火柴，标签纸，记号笔等（二）无菌器材名称数量备注100ml或250ml盐水瓶70个大翻70个10ml吸管3支5ml吸管5支1ml吸管1支青霉素瓶120个青霉素瓶塞120个（三）药品名称拓貝毂里备注重锯酸钾2400g浓H2SO44000ml双蒸水5000ml由技术室提前准备青霉素2瓶链霉索1瓶NaHCO3,KC1,NaCl,Na2HPO412H

2、2O,KB2PO4,结晶紫，甲醛，无水酒精等二、实验内容（一）配清洁液成分量备注重锯酸钾2400g重锯酸钾溶于水屮有时不能完全溶解，预先用2000ml热水助其溶解，再加入足量自来水，最后缓慢加浓硫酸。浓硫酸4000ml自来水20000ml切记：浓硫酸要缓慢加入，且边加边搅拌!（二）其他培养用液的配制及分工（学生分为三大组）1、RPMI-1640培养液成分备注RPMT-16402袋搅拌溶解后过滤除菌，塞好大翻，并注明名称配制LI期和纽•别。每实验室20瓶。每小组1瓶。NaHCO37.4g2、无菌分装5.

3、6%NaHCO2000ml大酒精瓶1个；无菌100ml盐水瓶20个。成分量备注无菌5.6%NaHCO350ml按照3ml/瓶分装，每室16瓶，每小组1瓶。无菌操作。3无菌青霉索瓶20个；无菌5ml吸管1支。3、无菌分装1%胰酶（技术室提供）按照1ml/瓶分装，每室15瓶。每小组1瓶。成分备注无菌1%胰酶20ml按照1ml/瓶分装,无菌操作。每室16瓶，每小组1瓶。无菌青霉素瓶15个；无菌lml吸管1支。4、Hanks7液（母液由技术室提供）成分量备注A液100按照1：1：18比例进行配比混匀，总量为2

4、000ml,过滤除菌,然后按照每瓶500ml分装，并注明名称配制LI期，每室4瓶。B液100双蒸水1800无菌10ml吸管2支，1000ml量筒1只，1000ml大酒精瓶1个，无菌500ml盐水瓶4个。5、双抗成分且X备注青霉素（80力U）2瓶配制双抗终浓度为：16000单位/ml；链霉索lOOOOpg/mlo按5ml/瓶分装，瓶口贴好胶布作好标记，胶布上注明配制日期和组别。每室20瓶。每小组1瓶。链霉素（lg）1瓶无菌Hanks'液100ml无菌5ml吸管1支，无菌青霉素瓶20个。6、血清的灭活和分

5、装成分量备注无菌小牛血清150ml总量为150ml,56°C的水浴锅中进行热灭活，火活时间30min,后按照每瓶5ml分装，并在瓶口处贴好胶布作好标记，胶布上写好口期和组别。每实验室30瓶。每小组2瓶。无菌5ml吸管1支，无菌青霉素瓶30个。7、lxPBS配制成分量备注NaCl8.0g总量为1000ml,每瓶按70ml分装，用硫酸纸包好瓶口，待高压灭菌后第一天派人再换大翻保存。每实验室15瓶。每小组1瓶。KC10.2gNa2HPO412H2O2.9gKH2PO40.2g去离子水至1000ml标好100

6、0ml刻度的酒精瓶或1000ml容量瓶1个，无菌100ml盐水瓶15个。8、染色液成分量备注结晶紫0.5g溶解、混匀，滤纸过滤甲醛10mlNaCl0.8g无水乙醇50ml去离了水加至100ml250ml量筒1只，500ml盐水瓶1个。9、分装VTP（由技术室提供）成分备注无菌VTP70ml无菌操作按4ml/瓶分装，并注明口期和组别。每实验室15瓶。无菌5ml吸管1支，无菌青霉索瓶15个。☆未特别说明上述试剂均放置2〜8°C冰箱保存备用。☆每次实验除菌过滤的顺序：三个班的RPMI-1640先滤，然后再滤

7、HanLs液。☆每组完成后统一收好，下次再分配到各小组。备注：常规实验室用品注意更换，包括酒精缸和酒精灯，棉球，一次性台布等。实验二鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养—、实验目的掌握鸡胚原代成纤维细胞的制备及培养的基本步骤；掌握活细胞的显微镜下观察；熟悉病毒在细胞内增殖的基本判断方法。二、实验原理离体动物组织通过温和的手段（机械和酶消化）形成单个细胞后，在适宜的外界环境屮，包括温度、酸碱度和气相环境，并给予充足合适的营养条件，能生存、生长形成单层细胞，这种原代培养的细胞具有原來体内所具备的基本特性，比如肌

8、肉细胞的收缩功能；上皮细胞的分泌功能等。通常把这种从体内取出组织细胞开始培养到第一次进行传代之前的这一段吋期称为原（初）代培养。原代细胞最接近体内细胞的特性，因而对外界环境的变化也最敏感，因此比较适合病毒的增殖，药物的作用机制等的研究。三、实验材料（按2人/组的量发放）9〜11日龄鸡胚1只，碘酒和酒精棉球若干，无菌器械一套，无菌无毒平皿2只；5或10ml吸管4支，1或5ml吸管1支，长青霉素瓶2只（带塞）；Hanks'液1瓶,RPMI-16401瓶,双抗