[精品]细胞培养技术扫盲.doc

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1、细胞培养技术扫盲培养细胞形态体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养屮悬浮牛长。1、成纤维型细胞在培养屮的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称Z为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞屮央有卵园形核，胞质向外伸出2-3厘米个长短不同的突起，除真正的成纤维细胞外，凡由屮胚层间质起源的组织细胞常呈

2、木类形态生长。2、上皮型细胞此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平不规则多角形特征，细胞屮央有园形核，细胞紧密相连单层膜样生长。起源于内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等组织细胞培养时，皆呈上皮型形态生长。3、游走型细胞本型细胞在支持物上散在生长，一•般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起,呈活跃的游走或变形运动，速度快且不规则。此型细胞不很稳定，有吋亦难和其它型细胞区别。在一•定的条件下，由于细胞密度壇大联成片后，可呈类似多角型或成纤维细腻包形态。常见于羊水细胞培养的早期。培养细胞形态分析培养细胞随贴附支持物形状不同而

3、形态各异，最常见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下生存屮的细胞是均质而透明的，结构不明显。细胞在生长期常有1-2个核仁在细胞机能状态不良吋，细胞轮廓会壇强，反差增大。若胞质屮吋而出现颗粒、脱滴和腔泡等，表明细胞代谢不良。培养用品的清洗与消毒D前我国细胞培养器皿主要仍使用能反复使用的玻璃器皿，清洗的主要H的为清除杂质和微生物，使在器皿内不残留任何影响细胞生长的成份。因而在组织细胞培养屮清洗和消毒是一项极为重要的环节。（一）清洗在组织细胞培养屮，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学

4、物质,均能影响培养细胞的生长。因此对新使用和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，II要根据器皿的组成材料不同，选择不同的清洗方法。1、玻璃器皿的清洗组织细胞培养屮，使用量最大的是玻璃器皿，故工作最最大的是玻璃器皿的清洗。一•般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和冲洗四个步骤。清洗后的玻璃器皿仅要求干净透明无油迹，而且不能残留任何物质。（1）浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿，在牛产及运输过程屮，玻璃表面带有大量的干I古I的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有-•些对细

5、胞有害的物质等。新瓶使用前应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸液（5）浸泡过夜，以屮和其屮的碱性物质。再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉，故用后要立即浸入水屮，II要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。（2）刷洗：浸泡后的玻璃器皿一•般要用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表而附着较牢的杂质。刷洗要适度，过度会损害器皿表而光泽度。（3）浸酸：清洁液是由重铭酸钾、浓硫酸和蒸镭水按一•定比例配制而成，其处理过程称为浸酸。清洁液对玻璃器血无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。清洁液去污能力很强。是清洗

6、过程屮关键的一环。浸泡吋器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时问一般为过夜，不应少于6小吋。清洁液可根据需要，配制成不同的强度，常用的下列三种：重珞酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸锚水（ml）（A）强清洁液631000200000B）次强清洗液1202001000（C）弱清洁液100100100清洁液配制吋应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制过程屮可使重锯酸钾溶于水屮，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配制过程屮可使重锯酸钾溶于水屮，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒

7、搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择塑料制品。配成后清洁液一般为棕红色。（4）冲洗：玻璃器皿在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗。使Z尽量不留污染或洁液的残迹。冲洗最好用洗涤装置。即省力、效果又好。如用手工操作，则需流水冲洗十次以上，每天水须灌满及倒干净，最好用蒸镭水清洗3-5次，晾十备用。2、胶塞的清洗细胞培养屮所用的橡胶制品主要是瓶塞。新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用来水冲洗，再做常规处理，常规清洗方法是：每次用后立即置入水屮浸泡，然后用2%NaOII或洗衣粉煮沸10-20分钊b以除掉培养屮的蛋白质。自來水冲洗后

8、，再用1%稀盐酸浸泡30分钟或蒸馅水冲洗后再煮沸10-20分钟，晾干备用。3、塑料制品的清洗塑料自制品现多是采用无毒并己经特殊处理的包装，打开包装即可用，多为一次性物詁。必要时用2%NaOII浸泡过夜，用自來水充分冲洗，再用5%盐酸溶液浸泡30分钟