鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析.pdf

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1、微生物与感染ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｅｓａｎｄＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ａｐｒｉｌ２５，２０１７，１２（２）：７９－８８ｈｔｔｐ：∥ｊｍｉ．ｆｕｄａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ·７９··论著·鼠冠状病毒核衣壳蛋白的抗体制备与抗原决定簇分析郭佳慧，文荣，王玉燕，张浩旸，刘红，徐娅佳，叶荣复旦大学基础医学院病原生物学系，上海２０００３２摘要：核衣壳（ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ，Ｎ）蛋白有稳定病毒基因组、调控病毒复制及细胞状态的特殊作用。鼠肝炎病毒（ｍｕｒｉｎｅｈｅｐａｔｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＭＨＶ）为乙型冠状病毒属的原型病毒，是研究冠状病毒Ｎ蛋白功能的经典模型。本研究用去污剂处理鼠冠状病毒粒子暴露Ｎ蛋白

2、，另用原核表达纯化的重组Ｎ蛋白分别免疫小鼠，制备多克隆及单克隆抗体。酶联免疫吸附试验（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）和蛋白免疫印迹分析结果显示两类抗体均具有高灵敏度和特异度，与甲型冠状病毒猪传染性胃肠炎病毒（ｐｏｒｃｉｎｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＴＧＥＶ）的Ｎ蛋白无交叉反应。原核表达缺失突变的Ｎ蛋白分析结果显示，多克隆抗体与单克隆抗体２Ｅ６识别的鼠冠状病毒Ｎ蛋白抗原决定簇完全一致，位于Ｎ端结构域（Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎ，ＮＴＤ）Ｃ端与ＳＲ之间的５８个氨基酸残基内。此外，基于单克隆抗体２Ｅ

3、６的ＥＬＩＳＡ及免疫荧光法能检测到感染细胞中和培养上清液中的Ｎ蛋白组分，且其含量与病毒复制的滴度一致。这些结果表明，鼠冠状病毒复制过程中粒子与细胞中的Ｎ蛋白可能维持相似的结构，使ＮＴＤ与ＳＲ之间的部分氨基酸残基一直暴露在表面，从而形成了优势抗原决定簇。关键词：鼠冠状病毒；核衣壳蛋白；抗体；抗原决定簇ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔｍｕｒｉｎｅｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎＧＵＯＪｉａｈｕｉ，ＷＥＮＲｏｎｇ，ＷＡＮＧＹｕｙａｎ，ＺＨＡＮＧＨａｏｙａｎｇ，ＬＩＵＨｏｎｇ，ＸＵＹａｊｉａ，ＹＥＲｏ

4、ｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３２，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ（Ｎ）ｐｒｏｔｅｉｎｏｆｖｉｒｕｓｐｌａｙｓｓｐｅｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｇｅｎｏｍｅ，ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｄａｐｔｉｎｇｃｅｌｌｕｌａｒｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅ．Ｍｕｒｉｎｅｈｅｐａｔｉｔｉｓｖｉｒｕｓ（ＭＨＶ），ｔｈｅｐｒｏｔｏｔｙｐｅｏｆＢｅｔａｃ

5、ｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，ｉｓａｃｌａｓｓｉｃｍｏｄｅｌｆｏｒｔｈｅｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓＮｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．ＶｉｒａｌＮｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍｄｅｔｅｒｇｅｎｔ－ｔｒｅａｔｅｄｖｉｒｉｏｎｓａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＮｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄａｎｄｕｓｅｄｔｏｉｍｍｕｎｉｚｅＢＡＬＢ／ｃｍｉｃｅｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｄｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｉｔｈｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖ

6、ｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｇａｉｎｓｔｔｈｅａｎｔｉｇｅｎｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｓｕｂｊｅｃｔｅｄａｎａｓｓａｙｆｏｒａｎｔｉｇｅｎｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｂｏｔｈｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｓｅｒｕｍａｎｄｍＡｂ２Ｅ６ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄａｒｅｇｉｏｎｃｏｖｅｒｉｎｇ５８ｒｅｓｉｄｕｅｓｍｏｔｉｆ．Ａｎｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗｉｔｈｍＡｂ２Ｅ６ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒＮｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｍｅｄｉｕｍｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓａｎｄｃｅｌｌｕｌａｒｌｙ

7、ｓａｔｅｓ．Ｔｈｅｓｉｇｎａｌｃｏｕｌｄｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ４ｈ基金项目：国家自然科学基金（３１１７０７８６、３１１００１１６）通信作者：叶荣Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．ＹＥＲｏｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｅｒｏｎｇ２４＠ｆｕｄａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ·８０·微生物与感染ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｅｓａｎｄＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ａｐｒｉｌ２５，２０１７，１２（２）：７９－８８ａｆｔｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅａｄｉｎｇｓｗｅｒ