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时间:2019-05-20
《基因免疫法制备抗PERV衣壳蛋白单克隆抗体》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、基因免疫法制备抗PⅨⅣ衣壳蛋翻单克隆抗体中文摘要蠹漂性爱转录瘸毒(嚣8驰g口甜sR《鼬耐nls。瓣姆)跫攒存在于凄镌髂内蕺侮,}培葬鲴蕊蒸鞭组内的反转录病毒,现已擞人、猴、獯猩、猫、火等哺乳动物,鸡、鸭、鹌鹑等鸟嶷及鱼类、爬行动物的体内分离或观察判这类病毒。20世纪70年代初,在猪的多种体外培养细胞系中发现了龛奎释羧熬C整轰转最癔豢鞍子,鼙猿藩舔性爱转录瘸毒《∞%瓣髓酾祭∞璐l稚蜮黼,PE获砩。由于猪的心血管系统、消化系统、皮肤系统等与人类具有较大的相似性。一直是人类异种器官移植的酋选供体。但是,自从1997年Patience等发现PERv
2、在体外可以感刍151多种人源细胞以来。猪一入秀释移毽静麟安龛瞧薅繇弓l超了天嚣j广泛关注。本实验采用基因载体免疫的方法制备抗PERvGag蛋白的单克隆抗体。在已构建的原核袭达载体脚唱ag的基础上,Pat法将剐掰蒸囡(约1572bp)进行扩增和克隧辨亚克隆遂真核袭遮载傣p辅蠛l。经蘩落PeR、单双酶韬鎏宠数及棱酸垮到潮定,爨终梅建藏序列正确的黧核表达载体,并将该质粒命名为p、AX一鹊g。以4%spaD80和2%甘油作为免疫饯荆氮疫五只雌性Barb,c小鼠,2个月后应用间接ELIsA法测定鼠尾搬涛的抗体效价,结暴除1只斑瀵效侩为l:勰∞豁,其余
3、4只均这到l:鞠∞。撮据蛊清抗俸效价静测定结累,选择效价最高的小鬣解细胞与鬣源sp2,0骨髓瘤细胞用聚乙:醇法(PEG)融合,采用1%HAT培养基进行选择性培养。约l周厢选择生长有融会细胞的克陵张以间接ELISA法进行阳性克隆燎选,用鸯隈耩释法缔选鞠馕单竞隆缎骧株,经过3一毒次单竞壤筛选磊获褥了4株分泌抗班斛O矗g蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞椿,效价测定结果袭明其中l株单抗其细胞培养上清教价达到l:100,腹水效价达到l:8x105。通过Giem姐染色体袋色鉴定法,诞爨所获褥的杂交瘥绷腱嚣染色体数目接避,l、鬣蹿缓臆毒sP2忍绷藏的絷色体数目
4、之和。尾抗体程类鉴定试嗣盒对褥劐的4株杂定癌细胞株避行了亚类箍定,除1株为I902b类抗体分子外,其余3株为I州类抗体分子。用Wbstem-BIomng试验、间接ELIsA法对褥瓢蛇单克隧抗体进行了特异性鉴定,续果表明4辣Me轴甄可与携Rv静g基因粒重组裘这产物发生特异蟪反应,也可与PERV瘸毒粒子中的天然Gag灏自发生特异性反应。从Ba¨)/c小鼠的腹腔中回收腹水,经PE媳6000沉淀粮提单抗后,闱丙烯葡聚糖凝胶层拼法Ct分子筛,啦化单觉礁抗体·本实验为避一步建立PERV豹攀竟隆蕊体粳瓣技术羹定7携矮羹璐。嚣瓣,涎臻当菜些抗原不翁获得或数
5、量不能满慰免疫的需簧时,基因免疫是一条可供选择的免疫方法。关键谴:猪肉滚瞧反转录辫毒,重缱G窭g蛋鑫,基嚣受痉,鼙突隆撬髂Prep魏ntionandCha憎cteri磷tionofM0nocIonaIAntibodi鹉A98i巍slPol℃i矗eE狂doge越。珏s薹t蛾l咚Vir秘sG囊gpl蛩lei纛ByGeneticImmunizationAbstr噩clw融{如develop珀ent甜modenlx韶。行托卵l蹦t氇螭ontechnoio鼯meimportanceofp{gsaso唱甜s韵氆钕s疆be鼢麟滋糟畦酶c繇ical嚣辩嘲l
6、雌.耩越蝴琏ye碲硪Ⅱ黼培溆Vi拄o&珊嘲寒缸{a_嘲醢雠porc赫Endog粕翻璐黜瓤州摧残褂,)e强{nfects醐玲鼬瞄撼cellss鹳氛嚣293-∞lb.P崩鞠ce掩se8羚hteamreⅥalcd小alPK-15cell嘲糟le馥辩PERVwhichcould柚§ctmanycells。nle矗bil晦斌infec蛀牿humancellsh豁receivedseriollscon∞mintermofsec谢1yofxenon砸lspl砒粕don。Tbmonitor啦姆exjs协ⅡceOfPERvitisextreme咖ponant
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