基因免疫法制备抗PERV衣壳蛋白单克隆抗体

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1、基因免疫法制备抗PⅨⅣ衣壳蛋翻单克隆抗体中文摘要蠹漂性爱转录瘸毒(嚣8驰g口甜sR《鼬耐nls。瓣姆)跫攒存在于凄镌髂内蕺侮，}培葬鲴蕊蒸鞭组内的反转录病毒，现已擞人、猴、獯猩、猫、火等哺乳动物，鸡、鸭、鹌鹑等鸟嶷及鱼类、爬行动物的体内分离或观察判这类病毒。20世纪70年代初，在猪的多种体外培养细胞系中发现了龛奎释羧熬C整轰转最癔豢鞍子，鼙猿藩舔性爱转录瘸毒《∞％瓣髓酾祭∞璐l稚蜮黼，PE获砩。由于猪的心血管系统、消化系统、皮肤系统等与人类具有较大的相似性。一直是人类异种器官移植的酋选供体。但是，自从1997年Patience等发现PERv

2、在体外可以感刍151多种人源细胞以来。猪一入秀释移毽静麟安龛瞧薅繇弓l超了天嚣j广泛关注。本实验采用基因载体免疫的方法制备抗PERvGag蛋白的单克隆抗体。在已构建的原核袭达载体脚唱ag的基础上，Pat法将剐掰蒸囡(约1572bp)进行扩增和克隧辨亚克隆遂真核袭遮载傣p辅蠛l。经蘩落PeR、单双酶韬鎏宠数及棱酸垮到潮定，爨终梅建藏序列正确的黧核表达载体，并将该质粒命名为p、AX一鹊g。以4％spaD80和2％甘油作为免疫饯荆氮疫五只雌性Barb，c小鼠，2个月后应用间接ELIsA法测定鼠尾搬涛的抗体效价，结暴除1只斑瀵效侩为l：勰∞豁，其余

3、4只均这到l：鞠∞。撮据蛊清抗俸效价静测定结累，选择效价最高的小鬣解细胞与鬣源sp2，0骨髓瘤细胞用聚乙：醇法(PEG)融合，采用1％HAT培养基进行选择性培养。约l周厢选择生长有融会细胞的克陵张以间接ELISA法进行阳性克隆燎选，用鸯隈耩释法缔选鞠馕单竞隆缎骧株，经过3一毒次单竞壤筛选磊获褥了4株分泌抗班斛O矗g蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞椿，效价测定结果袭明其中l株单抗其细胞培养上清教价达到l：100，腹水效价达到l：8x105。通过Giem姐染色体袋色鉴定法，诞爨所获褥的杂交瘥绷腱嚣染色体数目接避，l、鬣蹿缓臆毒sP2忍绷藏的絷色体数目

4、之和。尾抗体程类鉴定试嗣盒对褥劐的4株杂定癌细胞株避行了亚类箍定，除1株为I902b类抗体分子外，其余3株为I州类抗体分子。用Wbstem-BIomng试验、间接ELIsA法对褥瓢蛇单克隧抗体进行了特异性鉴定，续果表明4辣Me轴甄可与携Rv静g基因粒重组裘这产物发生特异蟪反应，也可与PERV瘸毒粒子中的天然Gag灏自发生特异性反应。从Ba¨)／c小鼠的腹腔中回收腹水，经PE媳6000沉淀粮提单抗后，闱丙烯葡聚糖凝胶层拼法Ct分子筛，啦化单觉礁抗体·本实验为避一步建立PERV豹攀竟隆蕊体粳瓣技术羹定7携矮羹璐。嚣瓣，涎臻当菜些抗原不翁获得或数

5、量不能满慰免疫的需簧时，基因免疫是一条可供选择的免疫方法。关键谴：猪肉滚瞧反转录辫毒，重缱G窭g蛋鑫，基嚣受痉，鼙突隆撬髂Prep魏ntionandCha憎cteri磷tionofM0nocIonaIAntibodi鹉A98i巍slPol℃i矗eE狂doge越。珏s薹t蛾l咚Vir秘sG囊gpl蛩lei纛ByGeneticImmunizationAbstr噩clw融{如develop珀ent甜modenlx韶。行托卵l蹦t氇螭ontechnoio鼯meimportanceofp{gsaso唱甜s韵氆钕s疆be鼢麟滋糟畦酶c繇ical嚣辩嘲l

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