酶联免疫吸附试验在药残检测中的不足及解决方法.pdf

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1、动物食品安全兽医导刊2010年第9期总第157期酶联免疫吸附试验在药残检测中的不足及解决方法郭淑萍，徐周乔（深圳市盐田区动物卫生监督所，广东深圳518081）食品安全问题已经成为全球关相应的免疫反应，颜色反应的深浅短运输时间，实验室保存试剂盒放注的焦点问题之一。近年来,兽药与标本中相应抗体或抗原的量呈正在4℃～8℃冰箱中存放，不可放在残留致使食物中毒的报道屡见报端,比。此种显色反应可通过ELISA检室内。使用前检查酶标板，将已干严重损害了人们的健康，而且造成测仪进行定量测定，这样就将酶化孔丢弃；酶标抗原必须严格按照说了意想不到的经济损失和巨大的政学反应的敏感性和抗原抗

2、体反应的明书中酶标抗原的稀释倍数进行稀治影响。传统的检测方法主要采用特异性结合起来，使ELISA方法成释并准确加样；酶标抗原失效可与高压液相色谱（HPLC）、气相色谱为一种既特异又敏感的检测方法。供应商联系，进行更换；在接收试一质谱法（GC－MS）等分析法检剂时要验明有效期，如试剂盒有效二、常出现问题的可能原测兽药残留，需要昂贵的仪器设备期太短，不能在有效期内用完则要因及解决方法和专业人员，费时、费力、成本高，求供货商换货。难以在基层推广。酶联免疫吸附试目前酶联免疫法检测用试剂盒种2.显色结束整块板吸光度值都验（ELISA）具有操作简便、灵敏度类繁多，有国外进口的，有

3、国内自很高。出现这种情况有两方面原因，高、样品容量大、仪器化程度和分行研制生产的，如盐酸克仑特罗的一是酶标抗原污染了盒内的其他试析成本低的优点，已成为目前畜产检测用试剂盒就有德国拜尔、美国剂，二是未进行洗版操作，直接加品药物残留检测中使用最普遍的方IDS、英国朗道、北京望尔、杭州迪显色剂。此种情况可以更换新批号法之一，几乎所有重要的畜产品药恩等。如何在众多的品牌中选择既试剂盒，并严格按照说明书中的洗残检测都已建立或试图建立ELISA，能满足检测要求又价格低廉的试剂板操作步骤进行稀释。如“瘦肉精”、莱克多巴胺、磺胺类、盒是一个问题。在实际检测中可以3.标准曲线形态不好，

4、吸光度沙丁胺醇等。尽管酶联免疫吸附试根据最低检测限、回收率、交叉反值偏高。主要是酶标抗原的稀释倍验有操作简便的优点，但在实践中应率。标准曲线图谱及数据，进行数偏低，反应温度过高。抗原稀释很容易出现各种各样的问题，影响选择。一般进口试剂盒性能稳定性时必须按照说明书稀释倍数进行稀因素较多，易出现假阳性结果等缺比国内试剂盒好。但不管进口或者释，反应温度在控制合理范围内。点。现将常出现问题的可能原因和国内试剂盒难免会造成假阴性或假4.标准曲线形态不好，吸光度解决方法以及影响因素作如下探讨。阳性，常出现问题的可能原因及解值偏低。主要是因为加酶标抗原前决方法有其共性。未进行洗板操

5、作，酶标抗原的稀释一、酶联免疫吸附试验原理1.显色结束仍没有颜色或吸光倍数偏高，反应温度过低。同样要ELISA方法的基本原理是酶分度值偏低。出现这种情况的可能的严格按照洗版步骤和抗原稀释倍数子与抗体或抗体分子共价结合，此原因主要有几个方面，一是试剂盒操作，控制反应温度。种结合不会改变抗体的免疫学特性，保存运输不当；二是使用前酶标板5.平行性不好。主要是加样及也不影响酶的生物学活性。此种酶标已完全干燥；三是酶标抗原未加或试剂量不准确，洗版后孔干燥时间记抗体可与吸附在固相载体上的抗稀释度过低或加错；四是温度过低过长，酶标抗原加入时有误差。要原或抗体发生特异性结合。滴加底或

6、试剂盒没有回温；五是检测试剂求定期校准移液器，移液器与移液物溶液后，底物可在酶作用下使其盒中的酶标抗原失效；六是试剂盒头要配套，使其吻合紧密，确保准所含的供氢体由无色的还原型变成超过有效期。确加入足量标本和试剂。操作时务有色的氧化型，出现颜色反应。因此，解决方法：试剂盒在运转过程中，必保持实验的连贯性，试验的保温可通过底物的颜色反应来判定有无要放在加冰袋的保温盒中，尽量缩温度、时间要一致，洗涤要彻底，57投稿信箱sydk2007@263.net动物食品安全兽医导刊2010年第9期总第157期不要手工洗板与洗板机洗板互换。（4）移液头重复使用而未清洗干净。溅，残留在反应

7、孔壁上，加样器吸酶标抗原稀释前注意混合均匀，使解决上述问题的措施是，使用新鲜头要清洗干净，避免污染，加样次用多道移液器进行加入操作。蒸馏水或去离子水配制试剂；试验序要与说明书一致，否则可导致结6.样品的高阳性率。主要是样前校准移液器，准确加入酶标抗原果错误，实验重复性差。品处理去脂肪或蛋白不彻底，实验或抗体的量；充分洗涤，不使酶标（3）手工洗板加洗液时冲击力不时样品要按要求进行前处理。记物由于洗涤不充分而残留；移液要太大，洗涤次数不要超过说明书7.样品的吸光度值高于零标准头尽可能一次性使用，否则就要对推荐的洗涤次数，洗液在反应孔内孔。引起的因素主要是