酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒抗体在酶标仪应用中的探讨.pdf

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1、·1234·检验医学与临床2012年5月第9卷第1O期LabMealClin，May2012，Vo1．9，No．10·经验交流·酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒抗体在酶标仪应用中的探讨王红(天津中医药大学第一附属医院300193)【摘要】目的探讨酶联免疫吸附试验在检测丙型肝炎病毒抗体中的敏感性和特异性。方法采用TECAN半自动酶标仪及配套的洗板机，以天津市临检中心提供的质控血清为参照，使用上海科华丙型肝炎病毒抗体酶免疫检测试剂盒，对阳性标本采用胶体金快速吸附法同时检测，对同一标本，在同一时间和同一温度下采用半自动酶标仪及肉眼判读。结果酶标仪判读阳性率高于肉眼判读，同时高于胶体金快速吸附法

2、。结论酶标仪检测结果优于肉眼判读结果，洗板机洗板优于手工洗板，但应选择合适的洗板次数。【关键词】丙型肝炎；病毒抗体；胶体金法；酶联免疫吸附试验DOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2012．10．041文献标志码：B文章编号：1672-9455(2012)10—1234—02丙型肝炎病毒(HCV)是1988年被鉴定出的一种非甲非3讨论乙型肝炎的主要病原体，感染呈世界性分布。1991～1995年丙型肝炎是由HCV引起的一种严重危害人类健康的传调查表明，我国HCV感染属中、高流行区，全国有4000万染性疾病，可以对肝脏组织进行持续性破坏_4]。至于引起肝损HCV携带者，平

3、均感染率为3．2。特别是1995年前后我国害的机制，目前认为可能是通过激活病毒特异性细胞毒性T部分省份因单采血浆交叉感染，导致献血者中发生丙型肝炎暴细胞而引起肝损伤，也可能是通过非特异性炎性反应细胞释放发流行，抗一HCV阳性率高达8On]。目前，抗一HCV检测试细胞因子，特别是7干扰素而引起肝损伤¨5]。丙型肝炎主要是剂均采用酶联免疫吸附试验(EusA)试剂盒。其质量的优劣经血液和血液制品传播，引起慢性肝炎或发展为肝硬化及肝直接关系到其病毒的检出，关系到输血的安全∞]。目前已经发癌。因此，建立一种针对丙型肝炎的具有较高灵敏度、特异性展到第3代产品，检测的特异性和灵敏度都比较高]。本文就和

4、稳定性的检测方法，对丙型肝炎感染早期诊断与治疗具有重EIISA和胶体金法两种检测抗一HCV方法的检测结果进行对要意义。比，对酶标仪的应用以及规范的洗板操作进行探讨，报道如下。本试验采用手洗与机洗酶标板，对抗一HCV阳性判断有重1资料与方法要指导作用。手工洗板污染大，速度慢，受操作人员主观影响，1．1一般资料样本为本院住院患者280例，以天津市临床但拍板干净；机器洗板对实验室污染小，工作量小，速度快，注检验中心提供的质控血清(抗一HCV2ncu／mL)为对照者。液量及静置时间可设定，稳定性强，但板内有残余试剂，洗板后1．2仪器与试剂采用上海科华抗一HCV诊断试剂盒(酶免手工拍板，可减小误差

5、。疫试剂盒)；英科新创(厦门)科技有限公司提供的胶体金吸附本试验ELISA检测s／co值大于8．0的阳性标本可能感试剂盒，按照说明书严格操作；采用TECAN半自动酶标仪。染HCV的时间长，病毒含量高。HcVRNA的存在是HCV1．3方法所有研究对象空腹取静脉血4mL，以3000在体内活动最直接的指标，有利于HCV感染的早期诊断。文r／rain离心10rain，分离血清，采用ELIsA进行抗-HCV检测，献[6]报道，只有当HCVRNA浓度较低时，只能用核酸方法阳性者再用胶体金法复检。各种方法均严格按照试剂盒内说检测，HCVRNA载量小于8×10copy／mI的血清其抗一HCV明书操作和判

6、读结果。的A值也处于最低临界值，此时s／co值较低。而s／co值在2结果1．O～2．5的标本可能处于窗口期，平均约为70d，病毒含量280份临床标本中，采用EIIsA检测45份阳性，只有s／低，胶体金吸附法检测和ELISA检测抗一HCV均具有较高的CO值大于8．0的38份标本中采用胶体金吸附法检测为阳性；敏感性，但胶体金法敏感性较低，有可能出现假阴性。因此胶而S／CO值为1．O～2．5的7份标本采用胶体金吸附法检测为体金吸附法只能作为参考。阴性。手洗5次静置5S，酶标板较为干净；机洗3次易出现假目测法受主观影响大，弱阳性标本易漏报，不能开展定量阳性；机洗5次可达手洗5次标准，若先甩去酶标

7、板内血清与检测，室内质控无法开展；酶标仪不受操作人员主观控制，灵敏酶结合物，用手拍干酶标板，静置5～10S，效果较理想。采用度高，能开展质量控制，能完整保存临床资料。对抗一HCV检目测法一般颜色较浅的容易漏报。胶体金法检测抗一HCV与测阳性的标本最好使用两种以上不同厂家试剂进行复验，如果EIISA相比较，胶体金法敏感性为84．4，特异性为100．0。都阳性，才可以判断为HCV感染。ELISA检测法由于操作过结果见表1。程中影响因素多