酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体出现假阳性的原因分析和解决方法_1

《酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体出现假阳性的原因分析和解决方法_1》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体出现假阳性的原因分析和解决方法［摘要］目的探讨丙型肝炎病毒抗体检测酶联免疫吸附法出现假阳性的原因分析和解决方法。方法对酶联免疫吸附法测定HCV抗体弱阳性的16份标本用核酸扩增荧光基因分析法检测HVC-RNA进行确证试验，确定其假阳性率，寻找引起假阳性的原因及其解决方法。结果酶联免疫吸附法测HCV抗体阳性的标本再用核酸扩增荧光基因分析法检测HCV-RNA，有75％的阳性率，其中假阳性的有25％。结论酶联免疫吸附

2、试验检测HCV抗体由于有许多影响因素可导致结果假阳性，对怀疑假阳性的标本应检测丙型肝炎病毒RNA来确诊。［关键词］酶联免疫吸附法；核酸扩增荧光基因分析法；丙型肝炎病毒抗体；假阳性　　目前临床上广泛应用的丙型肝炎病毒感染诊断方法主要是检测患者血清HCV抗体，酶联免疫吸附法是临床进行HCV诊断的主要方法之一［1］，因其灵敏度高、特异性强，在临床上得到了广泛的应用，但试验中有许多因素如不注意可能导致假阳性的结果。现对我院XX年5月～XX年4月检测的抗HCV抗体结果中16份弱阳性标本进行如下分析。　1材料与方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出

3、结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果标本来源004年5月～XX年4月我院门诊和住院患者检测HCV抗体的标本。仪器与试剂仪器：DA-7600核酸扩增实时荧光基因分析仪为达安基因股份有限公司产品；BIONADMODEL1575自动洗板机；普朗DNM-9602酶标仪。试剂：HCV-RNA测定试剂为达安基因股份有限公司产品；HCV抗体酶联免疫试剂盒。方法对酶联免疫吸附法检测HCV抗体弱阳性的标本中3>S/CO>1的16份标本，再用核酸扩增荧光基因

4、分析法检测HCV-RNA。　2结果两种检测方法结果见表1。表1两种检测方法结果比较　略　　由表1可知，酶联免疫吸附法HCV抗体阳性的标本再用核酸扩增荧光基因分析法检测HCV-RNA，有75％的阳性率，其中假阳性的有25％。导致酶联免疫吸附法假阳性的原因可能有如下几点。.1标本的处理标本分离不好即进行加样，血清与纤维蛋白原分离不完全，使纤维蛋白原吸附于孔壁，难以清洗彻底；标本重度溶血；相邻的标本出现阳性污染。.2加样课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和

5、理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果加样时间过长造成加样后放入恒温箱前等待时间过长；标本加完后加酶试剂时溅出孔外；加样后孔壁上贴有微小血块。.3温育温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发吸附于孔壁，难以彻底清洗；温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。.4洗板手工洗板时，孔与孔之间液体交叉。自动洗板机洗板时，洗板针堵塞，抽吸不完全；洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板次数少。.5洗液混合使用不同厂家出品的洗液。.6读板读板时板底不清洁。.7显色使用同一厂家生产的不同产品的显色剂；加显色剂时溅出孔外造成液

6、体回流。16份阳性标本中有4份是15岁以下的男性儿童，且不具备明显危险因素，可能是血清中存在某种干扰因素，有待于今后找出原因。解决方法标本若为凝固血，最好将标本先自然存放1h，再用3000r/min离心1min；标本若为抗凝血，采血后必须立即颠倒采血管5次以上，放置一段时间后，3000r/min离心1min。加样后加贴封片及时放入恒温箱。加酶试剂时不要滴出孔外，如有用吸水纸轻拭吸干。严格按说明步骤控制操作时间。但适当延长反应时间，可提高阳性标本特别是弱阳性的检出率，对阴性标本无明显影响课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验

7、条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果［2］。保证洗板针畅通，洗液注满各孔，洗完后在吸水纸上轻拍吸干。显色剂不要混用；不要用过期的显色剂；加显色剂时不外流。不同批号的试剂不要混用，试剂在用前应在室温中放置30min。每天应做质控、阳性对照、阴性对照。讨论酶联免疫吸附方法其原理为抗原抗体特异性结合和抗原抗体的酶标记，以酶催化底物显色来判断结果。影响酶联免疫实验的因素较多，诸如标本的采集保存、试剂的准备