丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的应用研究-论文.pdf

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1、·98·中国实用医药2014年4月第9卷第12期ChinaPracMed，Apr2014，Vo1．9，No．12丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的应用研究时慧挺【摘要】目的对丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的I床应用效果进行分析探讨，为今后的临床工作提供可靠的参考依据。方法采集230份血液筛查结果为阴性标本和230份质控血液标本，对其采取双抗原夹心法展开丙型肝炎病毒抗体检测，并对检测结果进行统计分析。结果本组138份HCV抗体阳性标本中经双抗原夹心法检出136份，有2例未检出，敏感性为98．55％。结论采取双抗原夹心法对HCV抗体进行检测的结

2、果准确可靠，敏感性较高，临床优势显著，值得关注并推广。【关键词】丙型肝炎病毒抗体；双抗原夹心法；临床应用丙型肝炎病毒(HCV)为通过血液或者是血液制品进行传确认试剂检测证实这2份标本均为阳性，双抗原夹心法检测播的一种病毒，在输血过程中丙型肝炎病毒传染为一个无法敏感性为98．55％。详见表1。忽视的途径，已经受到了广大医学工作者和患者的重视。流表1双抗原夹心法与ChironRIBA确认试剂检测结果比较行病学调查结果显示HCV感染的发生率较高，分布较广，出于对输血引起HCV传播进行控制的目的，临床需对献血者展开抗一HCV检测J。本次研究中

3、出于对丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床应用效果进行分析探讨的目的，对2303讨论份阴性血液标本和230份质控血液标本展开了相关检测，并流行病学调查结果显示_2J，HCV感染表现出显著的世对其检测结果进行了统计分析，现汇报如下。界性分布，在我国HCV感染者约有4OOO万，血液传播为其1资料与方法主要传播途径，其中输血为血液传播的一种主要形式，因此1．1一般资料标本来源于2012年1月～2013年12月间在对HCV感染血液传播进行有效控制的过程中，临床需对本院血液筛查阴性标本，抽取其中的230份作为研究对象，献血者展开抗一HCV检测。现

4、阶段采取酶联免疫吸附试验对另收集230份质控标本。抗一HCV抗体进行检测为临床诊断HCV感染的主要手段。在1．2方法实施抗一HCV酶联免疫诊断时所需试剂均为二抗作酶结合物，1．2．1研究方法对以上统计460份血液标本展开相关检由于血清中IgG的含量相对较高，因此少量的特异吸附会引起测，采取双抗原夹心法对丙型病毒肝炎抗体进行检测，并对假阳性结果的出现，进而对诊断结果和准确性产生影响。检测结果进行统计分析。PCR法对HCVRNA进行检测时，可依据检测结果对1．2．2检测方法所需试剂包括：吉比爱、Ortho丙肝病毒HCV感染进行早期诊断，然

5、而临床实践证实，该方法相对费抗体酶联免疫诊断试剂，除此外还需要ChironRIBA确认试剂。时、费力，且试剂费用也较为昂贵，临床普及存在困难，特抗原制备：嵌合表位抗原经包涵体的形式表达，利用离别是在基层医院，因此对新型有效检测方法进行开发具有很子交换层析方式展开纯化，而后经SephadexG一50柱凝胶过大的必要性，对于HCV感染的诊断具有重要意义。滤收集，经SDS—PAGE对抗原蛋白展开鉴定。霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统通过可溶性可表达获双抗原夹心法：采取浓度为50mmol／L的碳酸盐缓冲液得CTB2HCV融合蛋白抗原，适用于酶标

6、记抗原的制备，然对抗原进行稀释，多肽抗原工作浓度为：结构区多肽l51而由于CTB与大肠杆菌热不稳定性肠毒素B亚基(LTB)存在ml，NS4区多肽0．5l#ml，NS5区多肽0．25lg／ml，基因工程表较强的免疫交叉反应，人血清中LTB抗体含量较高，可能对达抗原工作浓度c7为1gCml，C11为1g／ml。在每个孔中加基于融合蛋白的双抗原夹心ELISA系统产生较为严重的非特入100，37~C条件下放置1h，而后在4"C冰箱中过夜保存，异性反应，在大肠杆菌中表达了大肠杆菌噬体MS2DNA多聚经浓度为30％的小牛血清PBST进行封闭，每孔

7、加入200l，酶与HCV抗原决定簇的融合蛋白，将HRP标记的CTB2HCV在37℃条件下放置1h，将封闭液弃去，取50山样品稀释液，融合蛋白决定簇的融合蛋白，对双抗原夹心的ELISA系统进每孔加5，37qc条件下放置30min，而后经PBST冲洗5次。行建立。取最适合的酶稀释度，经棋盘滴定法每孔加入50工作浓近几年双抗原夹心法在丙型肝炎病毒抗体检测中逐渐被度的酶标记抗原，37℃条件下放置15min，经PBST冲洗5次，应用，且取得了良好的效果，曾有学者对269份HCV抗体阳每孔加入5O山底物缓冲液和50山显色剂，37"C条件下放置性标

8、本采取双抗原夹心法进行检测，结果仅3份未检出，检10rain，充分显色。而后每孔加入5Om浓度为2mol／L的硫酸，测敏感性为98．84％_3J。本次研究中对138份HCV抗体阳性终止反应，采取酶标仪在450Bill波长