酶联免疫吸附试验在几种犬源人兽共患病检测中的应用及文库

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1、酶联免疫吸附试验在几种犬源人兽共患病检测中的应用及研究进展贾春玲，吕殿红，林立峰，温肖会，袁洁，魏文康*（1.广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫牛:公共实验室广东广州510640）摘要：随着宠物养殖量的增加，宠物疫病也越来越受到人们的关注，宠物源性人曽共患病不仅危害宠物养殖业的健康发展，而且严重危害了人类健康甚至于生命安全，早期诊断对冇效预防和控制宠物源性人畜共患病冇重要意义，酶联免疫吸附试验具有操作简单、快速、敏感性高、特异性强等优点，在宠物疫病检测屮发挥的作用越来越大。本文对酶联免疫吸附试验在犬源性

2、人兽共患病中的狂犬病、弓形虫病、布氏杆菌病、钩端螺旋体病检测上的应用与研究进展进行综述，旨在促进该技术在宠物疾病检测方面的应用与推广。关键词：犬源性人兽共患病；酶联免疫吸附试验；应用；进展随着人民生活水平的提高、人口老龄化的出现，家养宠物，特别是犬的养殖量越来越多；由丁•宠物与人的接触，导致的人兽共患病的发生也越来越多。常见的犬源性人兽共患病有狂犬病、弓形虫病、布氏杆菌病、钩端螺旋体病等，这几种病均为高度接触性的烈性传染病，除给宠物主带來较人经济损火，还严重威胁着宠物和人类的身体健康，甚至于人类生命安全。加强这

3、些疫病的早期诊断和抗体检测，对于预防和控制重大疫情的发生、保障人民生命和财产安全具有重大意义。酶联免疫吸附试验（enzyme一linkedimmunosorbentassay,ELISA）具冇操作简单、用途广、敏感高、可定性、定量等优点，广泛应用于科研和各项检测工作中，在犬源性人兽共患病的检测中将发挥重要的作用。现将ELISA原理、分类及其应用等介绍如下：1ELISA的原理和分类1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者VanWeeman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液屮微量物

4、质的同相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附实验（enzyme—linkedimmunosorbentassay,ELISA）oELISA的基木原理是将某种特定抗原或抗体吸附于固相载体表面上（包被），包被后的抗原或抗体可保持其生物学特性和免疫学活性，再用嗨标记抗原或抗体，保留其免疫学活性，同吋又具有酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体发生免疫反应，洗涤后，在固相载体上形成抗原抗体复合物，再加入酶标记的抗原或抗体，通过特异反应结合在固相载体上，这时固相上的酶量与标本屮受检物质的

5、量呈比例，加入酶反应底物后，底物被酶催化成为有色产物，颜色反应的深浅与抗原（或抗体）的含量成一定比例，用酶标仪在适当的波长读取吸光度值，计算出相应抗原或抗体含量。由于酶催化效率高，间接放大了免疫检测结果，使敏感度提高。常用的ELISA测定法冇：双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体等多种方法。2酶联免疫技术在几种犬源性人兽共患病检测中的应用及研究进展2.1ELISA在犬狂犬病检测中的应用狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（rabiesvirus）引起

6、的人兽共患疾病，人和其他所冇温血动物对狂犬病毒都易感。该病广泛分布于全世界，是一种自然疫源性疾病。近年來，我国狂犬病疫情一直呈上升趋势，导致的人员死亡数居我国法定报告传染病首位。2.1.1ELISA方法检测犬狂犬病病毒PerrinP于1986年建立ELISA方法，其敏感性及特异性与荧光抗体方法（FAT）冇很好的相关性（96%）,灵敏度略低于FAT"】。通过获取狂犬病病毒特异性多克隆抗体，运用ELISA技术检测脑组织中的狂犬病病毒核蛋口。可以检测血清1型（PV株）、血清3型（Mokola）株和欧洲蝙蝠狂犬病毒血清

7、1型（PV株）。由张国强等⑵建立的狂犬病病毒抗原的定量检测方法，采用狂犬病病毒aG株免疫豚鼠，制备抗狂犬病病毒多克隆抗体，纯化后以辣根过氧化物酶进行标记，建立双抗体夹心ELISA法检测系统，针对疫苗生产过程屮的病毒含量进行监测。用该方法对狂犬病疫苗进行抗原定量，检测市售不同毒株和细胞系生产的狂犬病疫苗，其结杲在2.4〜9.9IU/ml之间，与NIH法测定的疫苗效力具冇一定的相关性。该方法可对來自不同毒株和不同细胞系的狂犬病疫苗进行快速定量检测，为疫苗生产屮的质量控制提供了简便的监测手段oELISA检测狂犬病毒抗

8、原无需昂贵的荧光显微镜，操作简单、重复性好，适合作现场流行病学调查，也可做狂犬病疫苗或狂犬病病毒的鉴别诊断。2.1.2ELISA方法检测犬狂犬病病毒抗体国内外都冇利用ELISA技术生产的犬狂犬病病毒抗体检测试剂盒。赖红青等⑶运用购自法国SYNBIOTICS公司的狂犬病抗体检测ELISA试剂盒对40份釆自东莞市望牛墩镇已免疫狂犬病疫苗至少30d以上的犬只进行抗体监测，试验结果表明：检测狂