两株弧菌的分子鉴定【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20.—届）两株弧菌的分子鉴定目录摘要(Abstract)1引言11.1弧菌分类学现状与分类学历史11.1.1弧菌分类学现状11.1.2弧菌分类学历史11.216SrRNA简介与应用11.3研究的意义与内容22材料与方法22」实验材料、仪器和试剂22.1.1材料22.1.2仪器与设备22.1.3试剂32.2方法与步骤32.2.1实验材料准备及形态学观察32.2.2改良弧菌DNA提取方法32.2.3DNA测定42.2.4PCR扩增与测序42.2.5生物信息学分析53结果与分析53.1两株弧菌的分离及形态学观察

2、53.2两株弧菌的DNA提取及其测定63.316SrRNA基因的PCR扩增与测序73.416SrRNA基因序列分析83.5系统发冇分析84.讨论94.1形态学观察94.2改良弧菌DNA提取方法104.3弧菌分子鉴定结果105结论10参考文献12附录13附录一：XHS2-9号菌株的16SrRNA基因测序结果13附录二：461号菌株的16SrRNA基］大［测序结果13摘要：木文选用的环境样品为朱家尖浅水区水样，利用TCBS培养基培养梯度稀释平板法分离纯化出相应的两株耒知优势弧菌。木文建立了一种基于CTAB-NaCl法的改艮弧

3、菌DXA提収的方法，该法通过高盐和CTAB对黏性多糖的沉淀而除去多糖，从而从富含黏性多糖的弧菌中提取获得了高质量的DNA。以16SrRNA基因作为分子标记对环境样品中分离的两株未知弧菌样品进行系统发育学分析从而对其分类学地位进行鉴定，鉴定结果为461号菌株为弧菌屈(Vibrio｝的溶藻弧菌(J/,alginolyticus)，而XIIS2-9号菌株为弧菌属(Vibrio')的哈维氏弧菌(V.harveyi)关键词：弧菌；16SrRNA；分子鉴定；系统发冇学分析Abstract:Thisessayselectedforen

4、vironmentalsamplesfromzhujiajianphytalzoneandutilizedtheTCBSculturemediumtoculture,separateandpurifythecorrespondingdominatevibriosbythemethodofserialdilutionofwatersamples.Aftertheacquisitionofthecorrespondingtwostrainsofvibiros,WeestablishedaimprovedDNAextracti

5、onmethodbasedontheCTAB-Naclofthevibrios.Andthismethodutilizedthehigh-saltandCTABtoremovethepolysaccharidebyprecipitatingtheviscouspolysaccharide,inthismethodweacquiredhigh-qualityDNAfromthepolysaccharide-richvibrios.Wemadephylogeneticanalysesaboutthetwostrainsofs

6、eparatedunknownvibriosfromenvironmentalwatersamplesandidentifiedtheirtaxonomicalstatusbythemeansof16SrRNAgeneasamolecularmarker.Theidentificationresultshowedthatthe461strainistheV.alginolyticusoftheVibrioandtheXHS2-9strainistheV.harveyioftheVibrio.Keywords:vibrio

7、s；16SrRNA;molecularidentification;phylogeneticanalyses1引言1.1弧菌分类学现状与分类学历史1丄1弧菌简介及分类学现状弧菌分布广泛，与人类牛活密切相关山。传统形态分类学主要在菌落的形态特征和牛理牛化特征如菌体的显微结构形状，弧度大小，鞭毛数量与分布，荚膜有无与荚膜的形态特征以及弧菌运动性等方而和如革兰氏染色，发酵葡萄糖反应，氧化酶反应等相应的生理生化特征來对弧菌进行分类。多年來，许多学者致力丁弧菌分类学的研究，《伯杰氏系统细菌学手册》(1984,九版),3,g问世以来

8、，有许多过去未能认定的致病性弧菌有所证实及归属，这在弧菌分类史上是一个非常車要的里程牌。在众多的弧菌Z中，不同种的致病性差异很大，而随着当今发现的弧菌种类H益增加，弧菌分类学在致病性差异上的研究日趋重要。如01型霍乱弧菌被WHO定为国际检疫菌，但许多与01相似菌株却并不具备致病tt.[2]o但是目询弧菌分类学系统仍有