两株霍乱疑似弧菌的分子鉴别【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）两株霍乱疑似弧菌的分子鉴别目录摘要（Abstract）1引言11.1弧菌简介11.2霍乱弧菌简介11.3霍乱弧菌鉴别方法12材料与方法12.1材料12.1.1样品12.1.2主要试剂及其配制12.1.3主要仪器22.2方法32.2.1菌株的分离纯化32.2.2DNA提取32.2.316SrRNA基因PCR扩增测序32.2.416SrRNA基因系统发育分析42.2.5其他基因测序分析43结果和分析53.1弧菌的分离纯化53.216SrRNA基因序列分析53.3其他基因序列分析84讨论8致谢

2、：9参考文献10附录11附录一16SrRNA的PCR扩增序列11摘要：霍乱弧菌是海产品的主要致病菌株之一。具有致病性的菌种主要有O1群埃尔托型、古典型和O139群。本研究从象山港口采集水样和底泥样品作为实验材料，在弧菌的选择性培养基TCBS上进行分离纯化，分离得到7株弧菌。再进行16SrRNA基因的PCR扩增测序。接着构建系统发育树，鉴别出菌株NH87-21_和菌株4为霍乱弧菌。最后查阅相关文献，推测菌株NH87-21_和菌株4为O1群埃尔托型霍乱弧菌。通过本研究，初步鉴定出菌株NH87-21_和菌株4均为霍乱弧

3、菌，同时确认了16SrRNA基因可以用于霍乱弧菌的分子鉴别。关键词：弧菌；霍乱弧菌；16SrRNA基因；系统发育分析Abstract：VibrioCholeraeisoneoftheprimarypathogenicstrainstomarineproducts.OnlyVibrioCholeraeO19,O1ElTorandclassicalbiotypesarepathogenic.Inthisstudy,watersamplesandbottomsedimentsamplescollectedfromthe

4、XiangshanPortwerechoosedastheexperimentalmaterials.AndweislatedsevenstrainsinVibrioselectivemedium.Afterthat,16SrRNAgenePCRwasfollowedbythesequencing.ThanwebuitthePhylogeneticTreeandidentifiedstrainNH87-21_andstrain4asVibrioCholerae.Finally,weinferredthatstra

5、inNH87-21_andstrain4wereVibrioCholeraeO1ElTorafterreferencetorelatedpapers.Inthisstudy,strainNH87-21_andstrain4wereidentifiedasVibrioCholerae,whileweconcludedthat16SrRNAgenecouldbeeffectivetothemolecularidentificationofVibrioCholerae.Keywords：Vibrio;VibrioCho

6、lerae;16SrRNAgene;phylogeneticanalysis1引言1.1弧菌简介弧菌是一类广泛分布于自然界，尤以水生为多的革兰氏阴性菌。弧菌科（Vibrionaseae）大多数为氧化酶阳性，有端鞭毛、动力阳性。弧菌属（Vibrio）分解葡萄糖，产酸不产气，对弧菌抑制剂O/129（二氨基二异丙基喋啶）敏感。某些弧菌是人及水产动物的致病菌。如副溶血性弧菌（VibrioParahaemolyticus）、河弧菌(VibrioFluvialis)等能引起食物中毒；鳗弧菌(VibrioAnguillarum

7、)、鲑弧菌(VibrioSalmonicida)、哈维氏弧菌（VibrioHarveyi）等是某些水产养殖动物的病原菌。1.2霍乱弧菌简介霍乱是一种由霍乱弧菌（VibrioCholerae）引起的急性肠道病。主要症状是腹泻、迅速脱水以及呕吐。弧菌的致病过程包括黏附、侵袭、体内增殖及产生毒素等，这与弧菌产生的毒力因子有关[1]。目前发现的弧菌毒力因子有外毒素(Exotoxin)、蛋白酶(Protease)、荚膜(Capsule)、载铁体(Siderophore)及外膜蛋白(OuterMembraneProtein，

8、OMP)等。霍乱弧菌共有200多种血清型[2]，其中能引起霍乱的只有O1群古典生物型(ClassicalBiotype，CVC)、埃尔托生物型(ElTorBiotype，EVC)和O139群[3]。自17世纪以来，霍乱已经在世界上发生了七次大流行。前六次均是由O1群古典生物型引起。现在正处于开始于1961年以印度尼西亚苏拉威西岛为发源地的第七次大流行期间，由O1群埃尔托生