泥蚶半乳凝集素基因的克隆和表达分析【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物工程泥蚶半乳凝集素基因的克隆和表达分析1.课题研究意义及国内外研究现状研究意义：凝集素是自然界广泛存在的一大类非免疫来源的、无酶活性的糖类结合蛋白，能促使细胞发生凝集。半乳糖结合凝集素(galectins)是其中的一类，具有重要的生物学功能，参与细胞粘附、凋亡及免疫反应等多种生物学过程。国内在该领域的研究尚属空白，因而我们开展了此项研究，克隆、鉴定了捻转血矛线虫雌、雄成虫的galectin基因，为进一步的研究奠定了基础。研究现状：凝集素的最早研究始于1888年，Stimark从蓖麻子和红豆碱中发现了凝集素，从

2、无脊椎动物中提取凝集素的努力可上溯到1903年。Wrens等发现海绵动物中广泛存在凝集素，它们可能参与细胞免疫和体液免疫中对外来物质识别；Tunkijjanukij等从马贻贝的血淋巴中得到一种能与LPS特异结合的凝集素，它不同于与唾液酸特异结合的凝集素，该凝集素经纯化后能对多种海洋细菌表现抗菌活性，而未经处理的贻贝血淋巴对这些细菌和抗菌作用却不明显。Smith等(1994)从捻转血矛线虫肠道粘膜分离到一种半乳糖蛋白复合物，称为H—gal—GP(Haemonchusgalactose．conminingglycoprotein)，

3、用其免疫羔羊后攻虫，发现具有免疫保护性，可使虫卵排出量减少达93％，带虫量减少达72％。此后，捻转血矛线虫galectm蛋白作为疫苗候选抗原逐渐受到关注。另外，捻转血矛线虫是一种免疫抑制性虫体，有关该虫引起免疫抑制的机理尚不清楚，半乳糖结合凝集素是否在免疫抑制或免疫逃避中起作用也未见报道。国外已经克隆了5种捻转血矛线虫galectin基因(Greenhalgheta1.，1999；Newlandseta1.,1999；Greenhalgheta1.,2000)，但所用模板均为雌、雄虫混合物，单独克隆雌虫或雄虫galectin基因

4、尚未见报道。2.课题研究的主要内容、预期目标和研究方案研究内容：①引物的设计与合成。②以RNA为模板，利用引物进行反转录，合成cDNA，通过PCR扩增，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。③挑选重组质粒送到相关生物公司，利用ABIPRISMTM377型自动测序仪，应用载体本身的通用引物进行双向测序。④序列分析。预期目标：了解比较galetin基因在序列、表达、抗菌免疫等方面的特征和差异，阐明部分基因的调控机制和作用机理，明确育种价值。研究方案：1.根据已有的EST序列，然后用3′,5′RACE的方法扩增基因HbI，HbII的cD

5、NA全长；2.利用NCBIblast数据库、DNAman以及mega等相应生物分析软件，分析基因序列。3.利用荧光定量qRT-PCR法检验血液、肝胰腺、斧足、外套膜、闭壳肌、鳃等等组织中的表达规律；3.课题进度计划2010.8.25—2010.10.30：完成毕业论文选题，接受任务书，系统查找、收集相关资料，完成实验计划和方案；2010.11.1—2011.1.20：申请实验教室、实验用品和相关试剂开始进行实验，记录关键性的实验步骤和实验数据；2011.1.21—2011.2.25：数据的整理以及完成论文初稿。4.参考文献[1]

6、萨姆布鲁克J，拉塞尔DW．分子克隆实验指南[M]．科学出版社．2002：463—470．[2]郝志敏，李志勇，董金皋，等．玉米大斑病菌G蛋白B亚基编码基因的克隆与表达．农业生物技术学报，2008，16(6)：1O25—1030．[3]GreenhalghCJ,BeckhamSAandNewtonSE.Galectinsfromsheepgastrointestinalnematodeparasitesarehighlyconserved.MolecularandBiochemicalParasitology,1999,98:28

7、5~298.[4]LobsanovYDandRiniJM.Galectinstructure.TrendsinGlycoscjenceandGlycotechnology,1997,9:979~984.[5]RiniJM.Lectinstructure.AnnualReviewofBiophysicsandBiomolecularStructure,1995,24:551~577.[6]SmithWD,SmithSKandMurrayJM.Protectionstudieswithintegralmembranefraction

8、sofHaemonchuscontortus.ParasiteImmunology,1994,16:231~241.