半滑舌鳎凝集素相关基因分子特性和表达分析.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150150279上海海洋大学硕士学位论文题目：半滑舌鳎凝集素相关基因分子特性和表达分析Molecularcharacterizationand英文题目：expressionanalysisoflectin-relatedgenesfromCynoglossussemilaevis专业：渔业研究方向：半滑舌鳎免疫相关基因功能研究姓名：甘甜指导教师：陈松林研究员二0一八年四月五日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李军中国科学院海洋所研究员主席尤锋中国科学院海洋所研

2、究员委员杨官品中国海洋大学教授委员李莉中国科学院海洋所研究员委员王师中国海洋大学教授委员中国水产科学院黄海助理研究李希红秘书水产研究所员答辩地点黄海所1号楼3楼会议室答辩日期2018.05.21上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎凝集素相关基因的分子特性和表达分析摘要半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）是广泛分布于中国沿海的一种具有重要经济价值的海水鱼类。半滑舌鳎营养丰富，味道鲜美，使其成为近年来海水鱼类主要优良养殖品种，具有较高的经济价值。目前半滑舌鳎已实现了工厂化养殖与全人工繁殖。随着产业规模的不断扩大,近年来养殖半滑舌鳎陆续发

3、生各种疾病。疾病的频繁暴发容易造成鱼群大量死亡，严重制约了养殖业的发展。病害已成为制约其发展的重大障碍。采用传统育种技术与现代分育种技术相结合培育抗病高产的鱼类新品种将是解决鱼类病害问题的重要途径。凝集素（lectin）家族是一类非抗体的蛋白质或糖蛋白，可以和糖类物质特异性结合，具有凝集细胞和沉降聚糖和复合糖的作用。半乳糖凝集素（galectin）属于S-型凝集素，可以结合半乳糖苷，并作为一种模式识别受体可以特异性识别相关病原体分子从而间接参与抗体调理、细胞吞噬、补体激活和对微生物的致死等一系列生物体免疫活动。近来研究发现一种与半乳糖凝集素同源，

4、但是缺乏与半乳糖苷结合能力的新型半乳糖凝集素相关蛋白（galectin-relatedprotein）。本实验对半滑舌鳎GRP基因进行了克隆并将其命名为CsGRP。半滑舌鳎CsGRP基因全长785bp，ORF528bp，共编码176个氨基酸。基因结构分析显示CsGRP包含5个外显子和4个内含子。通过序列比对并对其进行相应的进化分析发现：CsGRP和玛丽鱼的相似性最高，其次是深裂眶锯雀鵰，相似性分别是68%和67%。qPCR结果显示较其他免疫器官，CsGRP在肝脏中表达量最高。被哈维氏弧菌感染后，CsGRP的表达量呈现下调趋势。此外，通过检测发现，

5、CsGRP的CpG岛在抗病家系中的甲基化程度高于易感家系。实验结果表明，CsGRP可能作为一种模式识别受体，在半滑舌鳎免疫调节机制中发挥重要作用。此外，DNA甲基化模式为研究表观遗传调控与免疫之间的关系提供了有价值的数据，并有助于未来动物遗传学和育种的研究。36ku囊泡整合膜蛋白（VIP36）属于L-型凝集素，参与细胞内分泌途径中糖蛋白的运输，能识别甘露聚糖且参与甘露聚糖的运输和分类。本研究克隆得到了半滑舌鳎VIP36基因两个转录本VIP36–X1和VIP36-X2的cDNA全长序列并进行了生物信息学分析，探讨了该基因在物种间的进化关系。该基因两

6、个转录本mRNA在半滑舌鳎不同组织、哈维氏弧菌感染后不同时间段的免疫组织中I上海海洋大学硕士学位论文的相对表达结果表明：VIP36基因在半滑舌鳎脑组织中表达量最高，在其他免疫组织中表达量较低；在哈维氏弧菌感染后不同时间段的脑组织中VIP36–X1表现为轻微上调趋势，而VIP36-X2的表达量未出现明显变化趋势。以上结果表明：VIP36基因在哈维氏弧菌感染半滑舌鳎后发挥的免疫调功能可能比较小。关键词：半滑舌鳎，CsGRP,VIP36，qPCR,甲基化II上海海洋大学硕士学位论文Molecularcharacterizationandexpressi

7、onanalysisoflectin-relatedgenesfromCynoglossussemilaevisABSTRACTHalf-smoothtonguesole(Cynoglossussemilaevis)isaneconomicallyimportantfarmedmarinefishthatarewidelydistributedalongtheChinesecoast.Becauseofitsdesirabletasteandnutritional,itwasselectedforaquacultureandwithhighlye

8、conomicvalue.Atpresent,halfsmoothtonguesolehasachievedfactoryfarming