半滑舌鳎hh信号通路相关基因的克隆表达及功能分析

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1、鷄寸尚斯ＶＷ／ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ博ｄｂ学位论文ＤＯＣＴＯＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ半滑舌錦ＨＨ信号通路相关基因的克隆表达论文题目：及巧能分析Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｓｉｎ出ｅ英文题目：ｈｅｄｅｈｏｓｉａｌｉｎｇａｔｈｗａｉｎＣｌｏｓｓｕｓｓｅｍｉｌａｅｖｉｓｇｇｇｎｐｙｙｎｏｇ作者：齐茜指导教师：温海巧教授学位类别：学术学位专业名称：７）

2、Ｃ产养殖研究方向：鱼类繁殖生理茸，７哥Ｉ＾谨１乂此论文献给中国海洋大学和黄海水产研究巧齐茜半滑舌錦ＨＨ信号通路相关基因的克隆表达及功能分析学位论文答辩日期：指导教师签字：心答辩委员会成员签字：衣马—－瓜了心］独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的，研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外论文中不包含其（注：他人己经发表或撰写过的研究成果，也小包含未获得如没有其他需耍特别一同工作。

3、声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料与我的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。＾曰学位论文作者签名：签字曰期：月又｜＞２＿长年主／学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：，１．学校有枚保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘允许论文被查阅和借阅。＾２，可＾采．学校可＾将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库巧行检索＾用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文

4、。同时授权清华大学中国＂学术期刊ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授（光盘版）电子杂志社用于出版和编入权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：吞导师签字：寺：签字曰期：年ｒ月支曰签字曰期丰《月曰Ｉ半滑舌ｌｉＨＨ信号通路相关基因的克隆表达及功能分析摘要＇一半滑舌錦，（Ｃｙｎｏｇ／ｏＭｗ是我国北方重要的海产经济鱼类么２－它味道鲜美，适应性强，雌性生长速度是雄性的３倍，因此了解半滑

5、舌錫的性腺分化与发生，，攻克性别决定机制对单性育种、提高育种质量等意义重大。目前半滑舌绩性别决定机制尚不十分清楚，且没有发现决定其性别分化的决定基因。因此对半滑舌錦性别决定相关基因进行功能分析显得非常紧迫，可Ｗ为人工控制半滑舌錫性别提供基础资料。本研究根据半滑舌鑛全基因姐测序获得的部分序列，通过中间序列验证及ＲＡＣＥ末端扩增，得到半滑舌觸ＨＨ信号通路ｃｓｓｈｈ、ｃｓｄ址、ｃｓｐｔｃｈｌｘＫｃｓｐｔｃｈｌｘ２ｍｏ－ｔ、ｃｓｓ等５个基因的ｃＤＮＡ全长通过ＲＴＰＣ民

6、分析了ｃｓｓｈｈ、ｃｓｄｈｈ、ｃｓｃｈｌ；ｐｘｌ、ｃｓ化ｈｉｘ２、ｃｓｓｍｏ、ｃｓｉｎ等６个基因在早期胚胎发育ｐｇ、雌雄成体不同组织、雌雄性腺发育不同期的表达；检测了ＣＳＳ化、ｃｓｄｈｈ、ｃｓｐｔｃｈｌｘｌ等３个基因启动子区的甲基化程度ｃｓｔｃｈ］ｘｌｃｓｔ油］ｘ２在染色体中；通过ＦＩＳＨ定位分析了ｐ与ｐ的位置；通过ＩＳＨ定位分析了ＣＳ她ｈ、ｃｓｐ化ｈ］ｘｌ及ｃｓｐｔｃｈｌｘ２在雌雄性腺中的表达建了ｃｓｓ化、ｃｓｔｃｈｌｘｌ与ｃｓｔｃｈｌｘ２的原核表达载体及

7、ｃｓｓ化与ＣＳ化ｈ的；构ｐｐ真核表达载体。主要研究结果如下：１．克隆得到半滑舌觸ＨＨ信号通路的５种基因，分别将其命名为ＣＳＳ化ｃｓｄｈｈ、、ｃｓｔｃｈｌｘｌ、ｃｓｔ油１ｘ２、ｃｓｓｍｏ。序列结构分析结果显示；ｃｓｓｈｈ基因全长，ｐｐ１９２２ｂｐ’其中＾１１１１１２６６６９，３１］了民３６０６９，〇１１？１２９６６口，编码４３２氨基酸，经预测该多化的相对分子质量为４７．２８ｋＤａ理论等电点６．７３ｂｐ，％。ｃｓｄ化基因全长２４，其中’５ＭＪＴＲ４７５ｂ，３

8、ＵＴＲ６１２ｂ，ＯＲＦ１３８６ｂ４３２，经ｐｐｐ，编码氨基酸预测该多狀的相对分子质量为５１Ｊ８ｋＤａ，理论等电点８．１７＜＝ｃｓｐｔｃｈｌｘｌ基因全长５２］２ｂｐ，＇＇５－２％ｂ－２，ＯＲＦ４２６９ｂｐ１其中ＵＴＲｐ，３ＵＴＲ８２ｂｐ，编码５４３氨基酸，生物序列分析显不编码区有１２次跨膜蛋白－，有固醇敏感多狀区（ｓｔｅｒｏｉｌｓｅｎｓｎｇｄｏｍａｉｎ，ＳＳＤ，并且信号狀区没有酶切位点。软件预测成熟ｃｓｐ