半滑舌鳎抗病相关snp标记的筛选及两种免疫相关基因的克隆与初步分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M120107165上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎抗病相关SNP标记的筛选及两种题目：免疫相关基因的克隆与初步分析ScreeningandIdentificationofDisease-resistantRelatedSingleNucleotidePolymorphismMarkers,英文题目：andCloningandPreliminaryAnalysisoftwoimmune-relatedGenesinhalfsmoothtonguesole(Cynoglossussemilaevis

2、)专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：海水鱼类遗传育种姓名：邢贺飞指导教师：陈松林研究员二O一五年五月二十日上》海_大学学值论文朦創14声明本入郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本入在导师的指导T,独立遊行研究工作所取得购成果。除文+己经明确注明和引用的ft容外，本论文不包含任何其他个入或ft体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本入亲自撰写，我对所写的内容负ft,并完全意识到本声明的法律结果ii本入承拒。孝位论文作者签名錢I年ISfH1:海海譯:大学学隹论交JSfti!舅援槪41学位论文作者完全T

3、解学校有关保留、使用擎位论文的規定，_意学校保窗聲向国家有失部门或机_!送交论文的复印件和ft子版，允许论文被查_或音H。本入授核J:ft海洋大孝胃以翁本学位论文_全部或部分内容编入有关数据库迸蕾»索，W以采用影印、缩_或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于学位论文作者签名：0期年

4、月g曰上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国海洋大学教授主席中国海洋大学教授委员中国海洋大学教授委员中科院海洋所研究员委员法I)中科院海洋所研宂员委员中国水产科学研宄院副研究员

5、秘书黄海水产研宄所答辩地点黄海水产研究所答辩日期2015.6.5上海海洋大学硕士学位论文半滑舌鳎抗病相关SNP标记的筛选及两种免疫相关基因的克隆与初步分析摘要半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）是我国特有的名贵海水养殖鱼类，其味道鲜美、口感爽滑、营养丰富，深受广大消费者喜爱，极具市场经济价值和养殖开发潜力。然而，高密度、集约化的养殖模式以及环境污染等原因，致使半滑舌鳎腹水、烂鳍、烂尾等细菌性疾病日益突出，严重制约了半滑舌鳎工厂化养殖产业的发展。将传统选择育种模式与分子标记辅助选择育种技术相结合，有利于半滑舌鳎抗

6、性品系的培育，单核苷酸多态性（SingleNucleotidePolymorphisms,SNP）被认为是一种极具应用前景的分子标记技术。本文以半滑舌鳎为研究材料，克隆了半滑舌鳎两种免疫相关基因Nramp和IL-10，并进行了初步分析研究；利用直接测序法筛选了Nramp基因抗病相关的SNP分子标记，以期为半滑舌鳎抗性品系培育提供技术支持。主要研究结果如下：1.半滑舌鳎免疫相关基因的克隆与初步分析研究利用cDNA末端快速扩增技术，对半滑舌鳎天然抗性相关巨噬细胞蛋白（Naturalresistanceassociatedmacrop

7、hageprotein,Nramp）和白细胞介素10（Interleukin10,IL-10）基因分别进行了克隆，并对其序列结构进行了分析研究。随后，对半滑舌鳎Nramp和IL-10基因感染哈维氏弧菌前后转录组水平的表达分析进行研究；并对半滑舌鳎IL-10基因原核表达进行了初步探索。1）半滑舌鳎Nramp基因克隆与表达分析Nramp属于膜整合转运蛋白，具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞抗菌活性等作用。本研究克隆了半滑舌鳎Nramp基因的cDNA序列，该基因全长3717bp，具有16个外显子，其中开放阅读框（openreadin

8、gframe,ORF）为1677bp，所编码蛋白含有558个氨基酸，该蛋白具有Nramp家族的典型特征：包括10个跨膜区（transmembrane,TM）、1个由20个氨基酸残基组成的胞质内转运蛋白特征结构域（consensustransportmotif,CTM）。半滑舌鳎Nramp基因其ORF末端有1个I上海海洋大学硕士学位论文类似于脊椎动物Nramp2中的铁反应控制蛋白结合位点（iron-responsiveregulatory-protein-bindingsites,IRE）。半滑舌鳎Nramp与其他14个物种的Nr

9、amp氨基酸序列同源性在63~91%之间，系统进化分析表明，半滑舌鳎Nramp和所有鱼类Nramp聚集为一簇，与其他物种Nramp2的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析表明，Nramp基因在半滑舌鳎脾脏和肾脏中的表达量最高，而在肌肉和性腺中的表达量最低；在哈维