加味四逆散治疗肝纤维化量效关系实验探究

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1、加味四逆散治疗肝纤维化量效关系实验探作者：郑旭锐，孙守才，李长秦【摘要】目的：观察加味四逆散不同剂量与疗效的关系,探讨该方抗肝纤维化的合适用量。方法:采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型，加味四逆散大、中、小不同剂量灌胃给药，免疫组织化学方法检测分析各组大鼠肝组织IV型胶原的含量。结果：加味四逆散中剂量影响效果优于小剂量和大剂量，3组之间的疗效呈中剂量〉小剂量>大剂量的关系，中剂量与小、大剂量比较有显著性差异(P<0.05),而小剂量与大剂量比较无显著性差异(P>0.05)o结论：加味四逆散对肝纤维化有肯定的治疗作用，而且中剂量疗效较好。毕

2、业论文【关键词】四逆散/治疗应用；肝硬化/病理学；大鼠1实验材料论文代写1.1实验动物雄性SD大鼠66只，体M(180±20)g,由第1.2药物及试剂加味四逆散由柴胡、枳壳、白芍、甘草、黄艮、丹参、桃仁等药组成（购自陕西中医学院附属医院药房，经本院药物鉴定教研室鉴定，均为真品）。药物加水浸泡常规煎煮，过滤，水浴蒸发至每1mL含生药3.75g,置于49冰箱保存备用。秋水仙碱（云南医药集团云南药业有限公司生产）,二甲基亚硝胺（DMN,美国Sigma公司生产），IV型胶原抗体（0.1mL兔抗鼠浓缩型，武汉博士德生物制品公司生产），免疫组化试剂盒（第四军医

3、大学免疫组化室提供）。2实验方法2.1动物模型制备大鼠在适应性饲养1周后随机选取8只作为空白对照组（A组）,其余58只均用DMN（用生理盐水稀释至5mg/mL）以10mL/kg体重腹腔注射，每日1次，每周连续3d,连续4周。毕业论文2.2分组4周造模结束后，58只大鼠共死亡8只，死亡率为13.7%,将剩余50只造模大鼠随机分为：B组（病理模型组）10只；（：组（秋水仙碱组）10只；。组（中药大剂量组）10只仁组（中药中剂量组）10只尸组（中药小剂量组）10只。论文代写2.3给药A、B组：以生理盐水4mL/只灌胃；C组：以秋水仙碱0.01mg/kg体

4、重灌胃；D组：以加味四逆散煎剂20mL/kg体重灌胃；E组：以加味四逆散煎剂10mL/kg体重灌胃；F组：以加味四逆散煎剂5mL/kg体重灌胃。以上各组用药均1次/d,连续用药30d后结束。论文代写2.4标本采集与制备实验结束时将大鼠断头处死取新鲜肝组织左叶，10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚5pm。2.5观测方法将各组石蜡切片均行常规HE染色及胶原纤维染色，光镜下观察。病理组织学分级标准为[2]:■”级,正常肝脏或无明显胶原纤维增生；峯”级，胶原纤维增生，中央静脉和汇管区有少量纤维索放散延伸，但无间隔形成；“+”级,胶原纤维增生，中央静脉和汇

5、管区结缔组织变厚，由此量增生，有个别菲薄的完全间隔形成（假小叶）;“”级，完全间隔较厚，假小叶大量形成。论文代写向四周伸出纤维索，形成不完全间隔；“”级,胶原纤维大2.6加味四逆散大、中、小剂量组中IV型胶原免疫组化观察石蜡切片，免疫组化染色按试剂盒说明进行，SP染色法,DAB法显色。IV型胶原含量以半定量的分级方式，根据显色深浅,分布范围及密度，分别划为4个等级[2]□0级：阴性；1级：较少，着色浅，高倍镜下明确阳性；2级：少量，着色中等，低倍镜下明确阳性；3级：大量，条索状或小片状分布,着色深。3实验结果论文代写3.1加味四逆散大、中、小剂量对

6、大鼠症状表现的影响实验期间空白组大鼠一直精神状态佳，皮毛光滑密泽，紧贴身

7、=

8、体,大便正常，进食无异常。所有造模组大鼠，则出现不同程度的精神不振，反应迟钝，饮食摄水明显减少，粪便稀薄,皮毛凌乱，缺乏光泽；治疗组于治疗3周后，大便逐渐干燥,进食、摄水增加，精神状态亦随之好转。其中中药中剂量组和秋水仙碱组恢复较快，中药大剂量组和小剂量组恢复较论文代写3.2加味四逆散大、中、小剂量对肝纤维化组织病理学的影响实验结束后，光镜下观察可见，空白对照组:HE染色见肝组织结构清晰，胶原纤维染色仅于汇管区和中央静脉有少许胶原纤维存在。模型组：HE染色见肝组织结构欠清

9、晰，汇管区及小叶内中度炎性细胞浸润；胶原纤维染色显示汇管区大量胶原沉积，呈较宽的条索状纤维深入肝小叶。各治疗组大鼠仅见轻度汇管区炎症，胶原纤维染色显示纤维结缔组织增生程度减轻，以中药中剂量组和秋水仙碱组作用明显，与模型组比较有显著性差异(P<0.05)，中剂量组与大、小剂量组比较有显著性差异(P<0.05)，而小剂量组与大剂量组比较无显著性差异(P>0.05)，见表1。表1肝纤维化各组大鼠肝脏病理组织学变化注：#与B组比较P<0.05，▲与D、F组比较P<0.05,△与D组比较P>0.05。3.3加味四逆散大、中、小剂量对肝纤维化大鼠IV型胶原的影

10、响实验结束后免疫组化结果显示冲药中剂量组肝脏IV型胶原沉积较大剂量及小剂量组为少，统计学分析有显著性差异(P<0.05);