加味四逆散治疗肝纤维化量效关系实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果加味四逆散治疗肝纤维化量效关系实验研究作者：郑旭锐，孙守才，李长秦【摘要】目的：观察加味四逆散不同剂量与疗效的关系，探讨该方抗肝纤维化的合适用量。方法：采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型，加味四逆散大、中、小不同剂量灌胃给药，免疫组织化学方法检测分析各组大鼠肝组织Ⅳ型胶原的含量。结果：加味四逆散中剂量影响效果优于小剂量和大剂量，3组之间的疗效呈中剂量＞小剂量＞大剂量的关系，中剂量与小、大

2、剂量比较有显著性差异(P＜)，而小剂量与大剂量比较无显著性差异(P＞)。结论：加味四逆散对肝纤维化有肯定的治疗作用，而且中剂量疗效较好。【关键词】四逆散/治疗应用；肝硬化/病理学；大鼠1实验材料实验动物雄性SD大鼠66只，体重(180±20)g，由第四军医大学实验动物中心提供。药物及试剂加味四逆散由柴胡、枳壳、白芍、甘草、黄芪、丹参、桃仁等药组成(购自陕西中医学院附属医院药房，经本院药物鉴定教研室鉴定，均为真品)。药物加水浸泡常规煎煮，过滤，水浴蒸发至每1课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结

3、果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果mL含生药，置于4℃冰箱保存备用。秋水仙碱(云南医药集团云南药业有限公司生产)，二甲基亚硝胺(DMN，美国Sigma公司生产)，Ⅳ型胶原抗体(mL兔抗鼠浓缩型，武汉博士德生物制品公司生产)，免疫组化试剂盒(第四军医大学免疫组化室提供)。实验方法.1动物模型制备大鼠在适应性饲养1周后随机选取8只作为空白对照组(A组)，其余58只均用DMN(用生理盐水稀释至mg/

4、mL)以10mL/kg体重腹腔注射，每日1次，每周连续d，连续4周。.2分组周造模结束后，58只大鼠共死亡8只，死亡率为%，将剩余50只造模大鼠随机分为：B组(病理模型组)10只；C组(秋水仙碱组)10只；D组(中药大剂量组)10只；E组(中药中剂量组)10只；F组(中药小剂量组)10只。.3给药A、B组：以生理盐水mL/只灌胃；C组：以秋水仙碱mg/kg体重灌胃；D组：以加味四逆散煎剂20mL/kg体重灌胃；E组：以加味四逆散煎剂10mL/kg体重灌胃；F组：以加味四逆散煎剂mL/kg体重灌胃。以上各组用药均1次/d，连续用药

5、30d后结束。.4标本采集与制备实验结束时将大鼠断头处死取新鲜肝组织左叶，10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚μm。.5观测方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果将各组石蜡切片均行常规HE染色及胶原纤维染色，光镜下观察。病理组织学分级标准为［2］：“-”级，正常肝脏或无明显胶原纤维增生；“±”级，胶原纤维增生，中央静脉

6、和汇管区有少量纤维索放散延伸，但无间隔形成；“+”级，胶原纤维增生，中央静脉和汇管区结缔组织变厚，由此向四周伸出纤维索，形成不完全间隔；“”级，胶原纤维大量增生，有个别菲薄的完全间隔形成(假小叶)；“”级，完全间隔较厚，假小叶大量形成。.6加味四逆散大、中、小剂量组中Ⅳ型胶原免疫组化观察石蜡切片，免疫组化染色按试剂盒说明进行，SP染色法，DAB法显色。　Ⅳ型胶原含量以半定量的分级方式，根据显色深浅，分布范围及密度，分别划为4个等级［2］。0级：阴性；1级：较少，着色浅，高倍镜下明确阳性；2级：少量，着色中等，低倍镜下明确阳性

7、；3级：大量，条索状或小片状分布，着色深。实验结果.1加味四逆散大、中、小剂量对大鼠症状表现的影响课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果实验期间空白组大鼠一直精神状态佳，皮毛光滑密泽，紧贴身体，大便正常，进食无异常。所有造模组大鼠，则出现不同程度的精神不振，反应迟钝，饮食摄水明显减少，粪便稀薄，皮毛凌乱，缺乏光泽；治疗组于治

8、疗3周后，大便逐渐干燥，进食、摄水增加，精神状态亦随之好转。其中中药中剂量组和秋水仙碱组恢复较快，中药大剂量组和小剂量组恢复较慢。.2加味四逆散大、中、小剂量对肝纤维化组织病理学的影响实验结束后，光镜下观察可见，空白对照组：HE染色见肝组织结构清晰，胶原纤维染色