如何建立高效液相色谱法测定有关物质的方法

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1、万方数据中国医药工业杂志ChineseJoumalofPharIIlaceuticals2007，38(1)如何建立高效液相色谱法测定有关物质的方法谢沐风(上海市药品检验所，上海200233)摘要：论述了如何建立高效液相色谱法测定有关物质，阐述了方法中各条件确定的原理，并指出质量标准制订中存在的一些问题。关键词：高效液相色谱法；有关物质；测定；方法建立中图分类号：TQ460．7+2；0657．7十2文献标识码：A文章编号：100l一8255(2007)01-0045．05HowtoEstablishAHPLCMeth

2、odforDeteminationofRelatedSubstancesinDmgsXIEMu—fengtShnngh口iInsnmte加rD跚gContml．Shnnghni20023蓟ABSTRACT：HowtoestablishaHPLCmemodfordetenninationofrelatedsubstancesindrugsisdiscussed．Theprinciplesofestablishmentofmechromatogr印hicconditionsandsomeproblemsinmedrawi

3、ngmequalit)，standardofdmgsareexempli矗ed．KeyWords：HPLC；relatedsubstance；dete姗ination；memodestablishment有关物质系药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、分解物、副产物、聚合体、异构体，以及不同晶体、旋光异构的物质，也可能是制剂生产过程或收稿日期：2006．05．29作者简介：谢沐风(1972)，男，硕士，从事新药复核和质量标准的研究。1bl：021．38839900×26136E-

4、mail：xiemufeng@sina．com．cn在贮藏、运输、使用过程中产生的降解产物等。由于有关物质的含量较少，所以选择专属性强、灵敏度高、重现性好的检测方法至关重要。目前常用的方法有HPLC法和TLC法，后法已有讨论⋯。本研究主要阐述HPLC法的建立过程。HPLC法检测有关物质的方法有：(1)杂质对照品法(适用于已知杂质)；(2)主成分自身稀释对照法(适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取婚婚皤婚皤皤昏婚婚婚婚皤婚婚皤舀皤皤婚婚皤婚皤婚婚皤婚婚皤舔皤婚《婚婚婚皤婚婚皤InAU400300200100O051

5、015加in1—1；2一中间体I；3一中间体II图3l与中间体的混合溶液色谱图3．4本品经6个月的加速试验[(40士2)℃，相对湿度(75土5)％)]与12个月的长期留样考察[(25士2)℃，相对湿度(60士10)％]，各有关物质与含量均未发生明显变化，表明本品在此条件下的贮存较稳定。参考文献：[1]艾建国，晋展．抗抑郁药DuIoxetineHydrochloride[J]．药学进展，2003，27(3)：188．万方数据·46得其对照品，简称“自身对照法”)；(3)归一化法(现已不多用)。前法为外标法、定量检测；后

6、两法均为限量检测。自身对照法又可分为加校正因子计算和不加校正因子计算。目前，国内多采用后法。1色谱条件的确定专属性是色谱条件建立的关键，通常是采用在被测物对照品(或供试品)中加入适量的杂质或辅料，以验证所选色谱条件能否将各杂质与被测物分离检出口]。应按1％(w／w)被测物浓度的各杂质量添加至被测物中，模拟被测物中可能存在杂质的状态，即有少量(约1％)杂质存在时能否与被测物达到完全分离(分离度大于1．5)，以验证系统适用性。只有这样才能较为客观、科学地反映被测物的实际情况。而不应将被测物与各杂质配制成相同浓度的溶液，因

7、为实际检测中不可能存在这种情况，且该浓度也不易确定。在实际检测时，由于被测物浓度较大，很易将相邻杂质峰包含其中。另外还需测定溶剂和辅料(检测制剂时)是否有干扰。目前，美国药典(USP)、英国药典(BP)及许多进口产品的质量标准中，有关物质测定方法学的专属性验证均采用此法。还须说明的是：杂质与杂质峰问的分离度达1．2即可，而被测物与其相邻杂质峰的分离度必须大于1．5。2检测波长的选择有关物质检测的研究对象是杂质，而非被测物。但测定则是通过各自的峰面积来表达，故波长的选择必须考虑被测物和各杂质在检测波长下的校正因子(，)

8、是否相同。应分别制备相同浓度的被测物与各杂质溶液，经紫外扫描后以吸光度相近的波长为检测波长。在该检测波长下，分别进样测定，由各峰面积计算校正因子。若厂为0．8～1．2，则表明被测物与各杂质的厂相同，可消除肭影响。若厂