高效液相色谱法测定尼可地尔中有关物质

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1、高效液相色谱法测定尼可地尔中有关物质［摘要］目的建立尼可地尔中有关物质的测定方法。方法碳十八烷键合硅胶(5um)填充4mmX25cm不锈钢柱；流动相为水：四氢咲喃：三乙胺：三氟乙酸(982：10：5：3)；检测波长：254nm；流速：调整流速使尼可地尔出峰时间约为18mino结果尼可地尔与主要杂质能得到有效分离，各杂质在0.2〜4.0ug/mL范围内呈良好线性关系。结论本测定方法灵敏度高，准确可靠，可以控制尼可地尔中有关物质的含量。［关键词］尼可地尔；有关物质；系统适用性［中图分类号］R917［文献标识码］B［文章编号］2095-0616(2014)02-52-03尼可地尔(nicorandi

2、l),又名硝烟酯,化学名为N-(a-轻乙基)烟酰胺硝酸酯，是日本在1976年研制的烟酸类衍生物。它是一种钾通道激活剂，可以舒张动脉血管，同时又具有硝酸酯基结构，可以舒张静脉血管。目前，尼可地尔作为一种新型药物，在临床上广泛用于心绞痛、高血压等疾病的治疗中，增加冠脉血流量，不影响血压，心率及传导，用于治疗心绞痛，与硝酸酯一样，烟浪丁可激活细胞质鸟昔酸环化酶，从而导致细胞内环磷酸鸟昔升高和细胞内钙的降低，同时引起血管平滑肌松弛。按照ICH指南Q2A、Q2B规定，要求为尼可地尔成品在出口放行及稳定性试验中有关物质的准确测定，提供合适的方法，目前普遍采用TLC方法来控制有关物质，但该方法适用性差，准确

3、度不高，不能准确定量。参考文献［1-7］方法,本文采用高效液相色谱HPLC法建立了尼可地尔中有关物质的分析方法，并对该方法进行了验证，其回收率、线性、专属性、精密度、检测限和定量限等均满足要求，方法可行［1］。1仪器设备与试剂试药HPLC高效液相色谱仪系统：沃特斯高效液相色谱仪2489检测器，2695分离单元（四元泵、717自动进样器、柱温箱）;软件：Empower3.X作站；HP1008打印机。尼可地尔工作标准品（20100701）；四氢咲喃（色谱纯200808066,美国天地公司）；三乙胺（色谱纯08071,美国默克公司）三氟乙酸（色谱纯09012,美国默克公司）尼可地尔酰化物工作对照品（

4、lot：20100601,含量：99.0%中间体）；N-（2-密基乙基）异烟碱硝酸酯（lot：20100602,含量：99.2%）o2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：C18（5pm）25mmX4mmo流速为1.OmL/min；检测波长为254nmo流动相：水：四氢咲喃：三乙胺：三氟乙酸（982：10：5：3）；进样量：10uL。2.2溶液制备供试品溶液：取20mg尼可地尔用流动相溶解并稀释至10.OmL容量瓶中作为样品溶液。取10uL样品溶液注入液相色谱仪。系统适应性：灵敏度测试准确量取ImL供试品溶液，加入流动相制成50mL作为系统适应性溶液。吸取lmL系统适应性溶液，加入流动相准确制成20

5、mL作为仪器灵敏度测试液，各取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图，在灵敏度测试图谱中，尼可地尔峰面积约为系统适应性测试图谱中尼可地尔峰面积的2%〜8%。2.3系统适应性试验溶剂测试：取稀释溶剂10PL进样，作为溶剂空白，考察溶剂对杂质测定有无干扰，样品测定中溶剂空白产生的峰系统测试：取10mgN-（2-轻基乙基）异烟碱硝酸酯用流动相制成10mL,吸取lmL加入10mL样品溶液，按上述条件进行测试，N-（2-轻基乙基）异烟碱硝酸酯与尼可地尔分离度应不小于3.0。系统重复性试验：取10uL系统适应性溶液，按上述条件测试连续进样6次。记录色谱图，按峰面积计算，尼可地尔峰面积相对平均偏差不超过1.5%

6、o2.4方法的专属性测试杂质及尼可地尔的分子结构确认（委托南京师范大学分析中心检测）：通过紫外分光光度计、液相色谱-质谱、红外分光光度计等方法进行结构解析确证各杂质的分子结构⑵。已知单一杂质的定性：分别取尼可地尔酰化物（lot：20100601,含量：99.0%中间体）10mg,至25mL的容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。进样，记录尼可地尔酰化物的保留时间，用保留时间对尼可地尔酰化物进行定性，N-（2-務基乙基）异烟碱硝酸酯（lot：20100602,含量：99.2%）15mg,至25mL的容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。进样，记录N-（2-務基乙基）异烟碱硝酸酯的保留时间，用保留时间对N

7、-（2-羟基乙基）异烟碱硝酸酯进行定性，各杂质的分离度和理论板数都符合规定，见图1。2.5强制降解实验分别精密称取尼可地尔样品细粉20mg分别置于20mL容量瓶中，共5份，分别在强酸1、2、3、5h,强碱1、2、3、5h,强氧化1、2、3、5h,高温、光照1、3、5、10d等条件进行强制降解实验，用溶剂稀释至刻度，即得1.Omg/mL的溶液，以上样品分别用液相色谱仪进样测定，由色谱图可看出各破坏条