高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质

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1、第30卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第7期2002年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry826～828高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质122312吴燕华刘文力阎红李楠蔡同一12(中国农业大学应用化学学院,食品学院,北京100094)摘要利用高效液相色谱法分析了红星、秦冠、小国光、黄元帅和富士5个苹果品种果皮和果肉中小分子酚类物质的分布情况。色谱柱为C18柱(150mm×4.6mm,Φ5μm),流动相为甲醇和水,柱温为30℃,流速为1.2mLPmin,线性梯度洗脱,紫外检测器波长为280nm。在此色谱条

2、件下,各组分均得到良好分离。标准样品的线性范围为0.9983～0.9999,平均回收率为75%～91%。关键词苹果,酚类物质,高效液相色谱法1引言在苹果汁加工过程中,酚类物质与果汁中的蛋白质结合,形成大分子的聚合物,从而使苹果汁产生沉淀,影响苹果汁的产品质量。酚类物质是果实在生长代谢中的次生产物,它对植物的生长发育和调[1～4]节、基因的诱导表达、信号转导、紫外辐射的吸收、果蔬产品的褐变、生物固氮有一定的影响。本实验研究了不同品种的苹果中酚类物质的情况,利用高效液相色谱分析酚类物质,采用反相C18柱,具有快速、操作简单、分离效果好和同时能将不同酚类物质分

3、开等优点。2实验部分2.1仪器和试剂LC2Class10AG高效液相色谱分析仪(日本岛津公司);lass10A色谱工作站(日本岛津公司);SPD210A紫外检测器。DiscoveryC18柱150mm×4.6mm,Φ5μm(日本岛津公司)。儿茶素、儿茶酚、表儿茶素、绿原酸、根皮苷、杨梅黄酮、桑色素、槲皮素、山奈素、柚苷、芹菜素,所有药品购于Sigma公司。2.2实验材料小国光和富士购于北京市昌平区南口镇;红星和金帅购于山东省德州市;秦冠购于北京市大钟寺市场。以上原料均为无病虫害且具有该品种典型特征,适宜成熟的果实,购得后储藏于0℃冷库中,一周内全部处理完

4、毕。2.3色谱分析条件色谱柱:C18柱150mm×4.6mm,Φ5μm;流动相:甲醇和水;柱温:30℃;流速:1.2mLPmin;进样量:10μL;检测器:紫外检测器,波长:280nm。线性梯度洗脱:0～35min98%甲醇和水;35～65min68%甲醇和水;65～70min98%甲醇和水。2.4样品的制备分析样品的制备:苹果皮5g(或肉10g),加入1mL6molPL的HCl,放置于石英砂中研磨;加50mL的蒸馏水用1molPL的HCl调pH至2.0;然后每次加入50mL的乙酸乙酯,萃取两次,搅拌5min,离心,分离出酯相和水相;将水相用6molPL

5、的NaOH调pH至7.0,每次加入50mL的乙酸乙酯萃取2次,分离出酯相。将酯相在30℃下旋转蒸发,用N2气吹干,再用1mL的甲醇定容。果汁样品的制备:苹果汁50.0mL用1molPL的HCl调pH至2.0,然后每次加入50mL的乙酸乙酯萃取两次,搅拌5min,离心,分离出酯相和水相。酯相和水相的处理方法与分析样品的制备方法一样。2001208216收稿;2002201215接受第7期吴燕华等:高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质8273结果与讨论3.1标准曲线的确定配制标样的甲醇混合溶液,其中含有儿茶素、儿茶酚、绿原酸、表儿茶素、芦丁、根皮苷、杨梅黄酮、

6、桑色素、槲皮素、山奈素、柚苷、芹菜素等标样。浓度依样品含量多少而定,分别稀释到1、4、8、16倍,进行液相色谱分析。3.2定性分析将标样配成含量已知的甲醇标准溶液,得到图1;再将苹果的样品在此色谱条件下分析,得到图2。比较标准样品及苹果样品的色谱图及样品的相对保留值,将相对保留时间相同的色谱峰进行定性鉴定。标准样品出峰顺序的先后依次为:儿茶酚、儿茶素、绿原酸、表儿茶素、根皮苷、杨梅黄酮、桑色素、槲皮素、柚苷、山奈素、芹菜素。图1酚类物质标准样品的液相色谱图Fig.1Chromatogramofstandardsampleofphenolics11儿茶酚(

7、catecol);21儿茶素(catechin);31绿原酸(chlogein);41表儿茶素(epicatechin);51根皮苷(phloridzin);61杨梅黄酮(myricetin);71桑色素(morin);81槲皮素(quercetin);91柚苷(naringenin);101山奈素(raempfro);111芹菜素(apigen)。3.3定量分析将标样配成含量已知的甲醇标准溶液,在相同的色谱条件下,将配制的标准溶液稀释成五个梯度的溶液,分别进行液相色谱分析。根据液相色谱中峰面积与样品中标准物质的含量关系进行线性回归,通过计算相关系数,得

8、出样品中的酚类物质的含量。在各相应的线性范围内,相关系数R均大于0199,说明峰