反相高效液相色谱法测定巴洛沙星有关物质的方法学研究

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1、反相高效液相色谱法测定巴洛沙星有关物质的方法学研究【摘要】目的采用RP-HPLC法测定巴洛沙星的有关物质。方法使用SMTC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液(47：53)［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］，检测波长为295nm，流速为1.0ml/min。结果巴洛沙星与各有关物质在上述色谱条件下能有效地分离。结论该方法结果准确、操作简单、灵敏度高、专属性强，适用于巴洛沙星的有关物质测定。【关键词】巴洛沙星；反相高效液相色谱法Studyondet

2、erminationofrelatedsubstancesinbalofloxacinbyRP-HPLC【Abstract】ObjectiveThereversedphasehighperformanceliquidchromatographymethodinetherelatedsubstancesinbalofloxacin.MethodsThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm×5μm).Themobilephaseispoundsolutionofacetonitrileand

3、0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetection，theflol/min.Balofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlyineationoftherelatedsubstancesinbalofloxacin.ThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm，5μm).Themobilephas

4、eispoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetection，theflol/min.ResultsBalofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlyethodisaccurate，simple，rapidandexclusive.ConclusionIt

5、couldbeusedfordeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacin.【Keyanceliquidchromatography巴洛沙星(balofloxacin)系由日本中外制药株式会社与韩国Choongol/L柠檬酸-乙腈（60：40）［三乙胺调pH=4］的反相液相色谱法测定主要中间体羧酸乙酯在巴洛沙星中的含量。本实验通过摸索新的色谱条件，采用乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液为流动相的高效液相色谱法，能同时测定了巴洛沙星的合成中间体羧酸乙酯、螯合物Ⅰ

6、及螯合物Ⅱ。该方法简单准确、分离效果好，对巴洛沙星的质量控制具有明显的实用价值。巴洛沙星及各中间体的结构式如图1所示。1实验部分1.1仪器与试剂高效液相色谱仪—TC18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液(47：53)［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］；检测波长：295nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μl。2结果与讨论2.1测定波长的选择分别称取巴洛沙星及各中间体适量，分别加乙腈溶解制成每1ml中约含6μg的溶液，照分光光度

7、法(中国药典2000年版二部附录ⅣA)，在200～400nm的波长处扫描，结果显示巴洛沙星在295nm处吸收最强，且其他中间体在295nm附近有较大的吸收，故选择295nm为本品有关物质测定的检测波长。2.2色谱柱及流动相的选择色谱柱：(1)DiamonsilTMC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(2)KromasilC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(3)SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）。流动相：(1)参照中国药典2000年版二部沙星类药物有关物质测定，采用流动相：

8、乙腈-0.05mol/L枸橼酸溶液(20：80)［用三乙胺调pH值至3.5］；(2)乙腈—0.4%十二烷基硫酸钠溶液（47：53）［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］。采用上述不同的色谱柱和流动相进行实验，结果表明：采用色谱柱(1)或(2)及流动相(1)，虽然主峰出峰时间适中且峰形较好，但各中间体在此流动相中50min都未见出峰；采用色谱柱(1)或(2)及流动相(2)，样品及各中间体出峰时间适中，但峰拖尾严重；采用色谱柱(3)及