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1、蚕业科学2013,39(6):1145—1149ISSN0257一4799;CN32一1115/S不同桑品种桑叶中的3种生物活性物质含量测定肖洪1丁晓雯1黄先智2,3沈以红2,3曾艺涛1秦樱锐1杨如1丁顺杰1（1西南人学食品科学学院，重庆市农产品加工重点实验室，重庆400715;2西南人学蚕学与系统牛•物学研究所，重庆400715;3家蚕基因组牛•物学国家重点实验索，重庆400715）摘要为了合理开发利用我国桑树资源的药用及保健功能,分别采用高效液相色谱法与比色法测定15个桑品种桑叶小的1-脱氧野尻霉索（DNJ）、单宁酸和Y-氨基丁酸含量。
2、15个桑品种的桑叶干物质中上述3种活性物质的质量比分别在0.6720〜1・2325、5・0983〜9.3947、1.4806〜3.0793mg/g之间，桑品种乐山花桑桑叶中的DNJ含量最高,百桑775桑叶小的单宁酸、X■氨基丁酸含量最高。检测结果表明，桑叶屮富含DNJ、单宁酸、y■氨基丁酸3种生物活性成分，但不同桑品种桑叶屮3种成分的含量存在极显著差异（P<0.01）o在桑树药用保健成分的产业化开发中，桑品种应作为原材料选择的一个重耍因素。关键词桑叶；1■脱氧野尻霉素；单宁酸；Y■氨基丁酸；桑品种桑叶中含有多种功能活性成分，如黄酮类、多糖、
3、超氧化物歧化酶（SOD）、1-脱氧野尻霉素（1-dc-oxynojirimycin,DNJ）、单宁酸（tannicacid）、Y■氨基丁酸（Y-aminobutyricacid,GABA）等［1］。其中,DNJ具有降血糖［2一3］、降血脂［4］、抗肿瘤［5］等功效；单宁酸貝有抗菌、抗病毒［6］及抗肿瘤活性［7］;GABA对哺乳动物的生长发育具有重要调节作川［8］,还具有降血压、调节心律失常、调节激索分泌、健脑、控制哮喘、治疗癫痫、镇痛、抗焦虑及抗惊厥等功效［9-l（）］o基于桑叶屮所含DNJ、单宁酸、GABA3种生物活性物质的医％保健功能，
4、木试验测左分析不同桑品种桑叶中这3种生物活性物质的含量，筛选适合开发提取桑叶DNJ、单宁酸、GABA的桑品种，为生产桑叶医药保健品提供优质原料。1材料与方法1.1材料和主要试剂供试的15个桑品种分别是云南9号、渝桑、伦教40号、桐选1号、实钻21、105新、育151、百桑775、农桑8号、新剑持、乌皮桑、101-北一号、中桑5801、乐山花桑、胜利大叶。各品种的桑叶于2012年5刀中旬采摘于重庆市蚕业科学技术研究院桑园。采摘时间为上午10:00左右，采摘卜-部枝条第6〜10叶位的成熟桑叶。桑叶采摘后带回实验室用纯水冲洗干净，阴凉处晾干表血•
5、水分示，每个品种取5（）（）g桑叶用肓接干燥法［11］将桑叶烘干，测算桑叶中的水分含虽，然后将烘干的桑叶粉碎（过60目）后装袋密封，常温保存备用。DNJ、单宁酸标准甜为北京德威钠生物技术有限公司产品；Y■氨基丁酸（GABA）标准品、甘氨酸（Gly）、9场基氯甲酸甲酯（FMOC-C1）、乙嶽色谱纯），均为Sigma公司产甜。1.2桑叶活性成分检测样品的制备121桑叶DNJ提取精确称取桑叶粉0.5g,加入35mL纯水，80°C水浴浸提2h（每20min摇匀1次），抽滤后用超纯水定容至50mL,即得桑叶DNJ样品提収液。1.2.2桑叶GABA提取
6、称取0.5g桑叶粉装入10mL的离心管中，力口2mL纯甲醇，室温振荡15min,5000r/min离心5min,离心后的固体样品再加2mL纯甲醇，5000r/min离心5min,弃上清液，沉淀物于70°C烘30min,使样品中的甲醇挥发，力II5mL纯水，50°C振荡2h,5000r/min离心15min,取上清定容至20mL,4°C保存备用。1.2.3桑叶单宁酸提取称取桑叶粉().5g,加入70%乙醇1()mL,于70°C条件下以功率为160W的超声波提取20min,然后5000r/min离心5min,共提取2次，扌巾滤后用纯水定容至50
7、mL备用。1・3桑叶DNJ含量的测定131DNJ标准液配制和标准曲线线性回归方程的建立准确称取20mgDNJ标准品于25mL容量瓶中，加超纯水溶解并定容，即得().8g/L的DNJ标准溶液，稀释至质量浓度为6()、12()、18()、24()、30()、480ug/mL备用。以DNJ的质蜃浓度为横坐标(x),吸光度为纵坐标(y)绘制标准Illi线，得DNJ的标准llh线线性回归方程为y=15776x—70392,相关系数r=0.9996,在60〜480ug/mL范围内吸光度与DNJ浓度呈良好的线性关系。1.3.2DNJ衍生化取DNJ提取液(
8、或DNJ标准液)300uL于5.0mL的离心管屮，加入0.4mol/L硼酸钾缓冲液(pH8.5)300uL,再加入5mmol/L的FMOC-C1(溶解于乙月青中)600ML,混匀
