《经典色谱法液相》PPT课件

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1、第10章经典液相色谱法液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀常压下输送流动相柱效较低分析周期长现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀高压下输送流动相柱效较高分析周期短1第1节液-固吸附柱色谱(LSC)（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）色谱条件的选择(四)操作方法2各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离，吸附能力大小用吸附平衡常数K表示（一）分离原理1.吸附与吸附平衡32.吸附等温线：一定温度下，某一组分固定相

2、和流动相之间达到平衡时，以Cs为纵坐标，Cm为横坐标得到的曲线。类型：线性、凸形、凹形等温线4吸附等温线色谱柱内溶液浓度的分布流出曲线5当吸附等温线是线性时,流出曲线是对称的,当吸附等温线是凸型或凹型时，流出曲线形成拖尾峰或前延峰，克服方法：减少进样量或样品浓度，利用等温线的直线部分，防止超载。6（二）、吸附剂对吸附剂的要求：（1）具有较大的表面积和一定的吸附能力（2）颗粒要有一定的细度(d=75-150μm，即100-200目)，且粒度均匀（3）与洗脱剂及样品不起反应，不溶解于洗脱剂常用：硅胶、氧化铝、聚酰

3、胺、活性炭、大孔树脂7吸附机制：表面的硅醇基，与物质形成氢键适用范围：微酸性（pH=4~5），适于酸性和中性物质失活：水与硅醇基结合使其失去活性活化：105-110℃加热30min粒度：100-200目1.硅胶（SiO2·H2O）中等极性吸附剂8碱性氧化铝pH9～10适于分析碱性、中性物质如：生物碱中性氧化铝pH7.5适于分析酸性、碱性和中性物质如：生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸碱中不稳定的苷类、酯、内酯等化合物酸性氧化铝pH4～5适于分析酸性、中性物质如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质2.氧化铝：吸

4、附力较强9硅胶、氧化铝的含水量与活性关系硅胶含水量%活度级氧化铝含水量%0Ⅰ05Ⅱ315Ⅲ625Ⅳ1038Ⅴ15活度测定法：Brockmamn法结论：含水量越低，活度级别越小，吸附力越强。103、聚酰胺商品名：锦纶、尼龙-6不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸分离机制：主要是氢键吸附适用对象：黄酮类、鞣质、醌粒度：20~200目氢键能力↑强组分越后出柱114、大孔树脂是一种具有大孔网状结构的高分子吸附剂。不溶于酸、碱及有机溶剂分类：非极性和中等极性特点：在水中吸附力较强，在有机溶剂中吸附力较弱适用对象：皂苷类、

5、黄酮苷类化合物粒度：20~60目12（三）色谱条件的选择：1.被测组分性质（极性大小）：烷烃＜烯烃＜醚<硝基化合物<二甲胺＜酯＜酮＜醛<胺＜酰胺＜醇＜酚＜羧酸依据被测组分、吸附剂和流动相的性质132.吸附剂的选择：吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强强极性物质——选择弱吸附剂弱极性物质——选择强吸附剂酸性成分：硅胶碱性成分：氧化铝黄酮类：聚酰胺14“相似相溶”原则：分离极性大的物质应选用极性大的溶剂作流动相，分离极性小的物质应选用极性小的溶剂作流动相3、流动相的选择流动相极性顺序：石油醚<环已烷<苯<甲

6、苯<乙醚<三氯甲烷<乙酸乙酯<丙酮<正丁醇<乙醇<甲醇<水常用：混合溶剂如：不同配比的甲醇-水或甲醇亲脂性成分用氯仿、乙酸乙酯154.三者关系：组分吸附剂流动相极性大活性小极性非(弱)极性活性大非极性或弱极性16（四）、操作方法2、上样3、洗脱1、色谱柱的制备要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。装柱时柱要垂直，表面平整。固定相的用量适宜。柱体：色谱柱固定相：颗粒大小100-200目，用量方法：干法装柱、湿法装柱4、检视17第2节液-液分配柱色谱法（LLC）一、基本原理原理：利用不同组分在固定相中溶解度不同，而进

7、行分离过程：18二、载体作用：支撑与分散固定液的作用要求：1）化学惰性，不易与其它物质发生反应2）对被分离组分没有吸附能力3）能吸留较大量的固定相液体常用载体：硅胶、硅藻土、纤维素等19三、固定液、流动相及其选择分类：正相分配色谱和反相分配色谱正相分配色谱：固定液极性大于流动相固定液：水、各种缓冲溶液、甲醇等强极性物质流动相：石油醚、三氯甲烷等低极性物质适合分离的物质：极性物质各种极性物质流出顺序：t非极性

8、与水相混溶的有机溶液适于分离物质：中等极性至非极性物质各种极性物质流出顺序：t极性