紧急输送道路确保のための盛土耐震补强工法

《紧急输送道路确保のための盛土耐震补强工法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、*&卷&期生物工程学报C"D:*&!":&*%%)年*(月0.&)$’$1,*")(2,34&,#$-.),2,+5EFG"HI>*%%)""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""青蒿发根生长及青蒿素生物合成动态的研究刘本叶叶和春!李国凤陈大华耿飒张艳萍陈建林（中国科学院植物研究所北京*(((%$）摘要从’&’条发根农杆菌/011*.)$&转化的青蒿株系(,.发根中，筛选出’个生长较快的发根系，这’个系在生长速度和青蒿素含量上均有显著差异，其中发根系23+%青蒿素产率最高，达到每月$$#,.45／6。青蒿发根的生长量和青蒿素含量极显

2、著高于未转化根和愈伤组织。青蒿发根在分批培养中没有明显的迟滞期，接种后第’天进入指数生长期，第**天生长最快，第,(天进入稳定期。青蒿发根中青蒿素含量呈明显的“与生长相关”特性，在指数生长期，青蒿素含量缓慢下降，生长速度减缓后，青蒿素含量上升，发根生长停止后，继续延长培养时间，青蒿素含量也不再提高。在分批培养中，青蒿发根适宜的培养时间为,*7。关键词青蒿，发根，发根农杆菌，青蒿素学科分类号8%&-发根农杆菌39质粒转化的青蒿（!"#$%&’&(())*(6:）发根培养是利用生物技术工业化生产抗疟新药青蒿素的很有希望的途径之一［*，,］，我们已经成功地建立青蒿发根培养系统［$］，本文报道在分批培

3、养中青蒿发根生长及青蒿素生物合成动态，为建立适宜的发根培养程序和进行理化因子调控研究提供依据。!材料与方法!"!青蒿未转化根的诱导及培养剪取青蒿试管苗叶片，接种在含!//(#.45／6的改良;<固体培养基上，,.=暗培养。$!&周后，剪取叶片切口处长出的不定根，在相同成分的液体培养基中，*((>／49?摇床上继代培养。!"#青蒿愈伤组织的诱导及培养将青蒿试管苗叶片剪成小块，接种在含@/(#,45／6，!//(#.45／6的;<固体培养基上，,.=暗培养，$周后在叶片伤口处产生愈伤组织。将大块的愈伤组织从叶片上切下，在相同培养基中继代培养。!"$青蒿发根培养及生长量的测定用发根农杆菌（!+",#

4、(-#$"&*%".&/,+$)$’）/011*.)$&转化青蒿株系(,.诱导发根［$］，经除菌培养建立起’个无菌发根系，均保存在改良;

5、定干重和青蒿素含量，试验重复!次。!"#青蒿素含量的测定!"#"!青蒿素提取：将烘干的青蒿发根研成细粉，准确称取$)!#*细粉置于提取瓶中，加入"$%&3$!0$5石油醚，在超声波浴中提取3$%./，过滤，减压回收溶剂，将残渣用"%&甲醇重新溶解，"!$$$-／%./下离心"$%./以沉淀不溶部分，上清液用于测定青蒿素含量。!"#"$高压液相检测样品及标准品的制备：取青蒿素甲醇溶液!$$"&于"$%&试管中，加入6$$甲醇、+%&$)!789:;溶液，混匀，在#$5水浴中反应3$%./，冷却至室温，取"&$)#%&反应液于")#%&塑料离心管中，加入"$$"&甲醇、+$$"&$)$#%<&／=

6、醋酸，混匀，过>"6预分离小柱纯化。按照同样方法制备用于高压液相分析的青蒿素标准品溶液，标准品浓度分别为每"$%&溶液中含青蒿素标准品$、+$、6$、"!$、"0$、!$$、!+$。"*!"#"%高压液相检测条件：色谱柱为>"6柱，"#$%%?+)0%%，流动相为$)$"%<&／=磷酸缓冲液：甲醇（##：+#），@;A)$，流速"%&／%./，紫外检测器检测波长设在!#6/%，注射体积"$。在上述条件下，青蒿素出峰时间大约在+%./（图"，B）。"&表!青蒿发根&、未转化根’和愈伤组织生长量(比较$结果与分析)&’*+!,-./&012-3-450-678-48&1090--7&，:370&3

7、24-0.+;’($"!青蒿发根与未转化根及愈0--7&3;(&**:2伤组织的比较’9CD-.9&E’9.-F-<9&&IE青蒿发根生长量显著地高于J-FKD.*1C（*／H&9EL）$)AA9$)+"M$)3#,未转化根和愈伤组织，N值高达"$!A，愈伤组织和未转化根生长量之间没有显著差异（表"）。在青蒿愈伤组织中，没有检测到青蒿素，在青蒿未转化根中只检