二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建

《二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、※生物工程食品科学2010,Vol.31,No.21271二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建李黄金，陈伟，赵林，柴伟佳，唐伟(广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州510006)摘要：为构建一种食品残留检测用二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体(sdsFvCAP)。以抗氯霉素抗体可变区基因为模板，通过引物突变PCR在轻链和重链的可变区分别引入一个半胱氨酸定点突变，以重叠延伸PCR组装成sdsFvCAP。在大肠杆菌系统强启动子T7驱动下，sdsFvCAP基因不能单独表达，而通过同义突变降低其5＇端序列GC含量

2、则可实现高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在，经β-环糊精分子伴侣系统复性可获得亲和力与母本抗体相似的sdsFvCAP。所构建的sdsFvCAP具有取代单克隆抗体用于氯霉素残留检测的潜力。关键词：氯霉素；二硫键稳定的单链抗体；高效表达；β-环糊精分子伴侣；复性ConstructionofDisulfide-StablizedSingleChainVariableFragmentDirectedagainstChloramphenicolLIHuang-jin，CHENWei，ZHAOLin，CHAIW

3、ei-jia，TANGWei(CollegeofLifeScienceandBiopharmaceuticals,GuangdongPharmaceuticalsUniversity,Guangzhou510006,China)Abstract：Toconstructadisulfide-stablizedsinglechainvariablefragmentdirectedagainstchloramphenicol(sdsFvCAP),bothclonedVgeneswereintroducedac

4、ystinecodebysite-specificmutagenesis,thenassembledintosdsFvCAPgenebyoverlapextensionPCR.UnderthecontrolofstrongpromoterT7,thesdsFvCAPgenewasfailedtobeindividuallyexpressedinEscherichiacoli,butover-expressedasinclusionwhenGCcontentintheterminal5sequencewa

5、sdecreasedbysynonymousmutation.Theinclusionproteinwasrefoldedwithβ-cyclodextrincompanionsystem,andshowedaffinitysimilartoitsparentmonoclonalantibody(MAb).ThesdsFvCAPpreparedinthisstudycouldbepotentiallyusedinsteadofconventionalantiseraorMAbfordevelopment

6、ofarapidandaffordableimmunoassayforthedetectionofresidualCAPinfoods.Keywords：chloramphenicol；disulfide-stablizedsinglechainvariablefragment；over-expression；β-cyclodextrincompanion；renaturation中图分类号：Q81文献标识码：A文章编号：1002-6630(2010)21-0271-04氯霉素(chlorampheni

7、col，CAP)是一种可引起人类区的小分子基因工程抗体，该类抗体既保留了母本抗体再生障碍性贫血粒状白细胞缺乏症等严重疾病的抗生的亲和力又便于基因工程手段生产，故得到了较广泛的素，自1994年起便被联合国禁止使用，我国亦自2002研究和应用。但该类抗体的两个可变区之间由于缺乏母年起明确规定动物源性食品中氯霉素残留不得检出[1]，本抗体那样的链间二硫键，因此稳定性较差。二硫键但由于廉价高效，目前仍被广泛非法滥用于养殖业，给稳定的单链抗体(sdsFv)即是通过模拟天然抗体的结构而在单链抗体基础上引入一对二硫键

8、的构建形式[6]。本实人民生命健康和我国动物源性食品相关产品的出口贸易验组曾报道了抗氯霉素单克隆抗体可变区基因的克隆[7]，带来了较大的挑战。特异性抗体在食品有害残留检测中具有重要意义，高质量的抗体是食品有害残留样品的制本实验在此基础上研究一种二硫键稳定的抗氯霉素单链备和检测的关键试剂[2]。单克隆抗体(MAb)具有特异性抗体(sdsFvCAP)的构建，为进一步研制基于基因工程抗体强和亲和力高的优点，但其现有生产技术存在生产成本技术的氯霉素