小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库构建

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1、小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建前言猪囊尾蚴病cysticerosiscellulosae是由猪带绦虫Taniasolium的幼虫引起的一种人畜共患寄生虫病流行范围广不仅严重危害人体健康还给养猪业带来巨大的经济损失据调查我国人群猪带绦虫感染率达0.112%囊虫感染虽无准确数字且囊虫病患者明显少于绦虫病患者但危害严重碍肢体瘫痪甚至昏迷死亡其中脑囊虫病患者尤甚严重者可引起失明精神障目前对此病的最佳防治手段应该是药物治疗和疫苗预防相结合然而由于猪囊虫寄生部位特殊生活史复杂抗原成分

2、众多且变异发生迅速使得防治工作的难度仍然是有增无减尤其是人囊虫病的诊断治疗和预防在寄生虫学研究领域诊断和疫苗是两大热点随着分子生物学及基因工程技术的发展国内外对寄生虫疫苗研究集中在分子疫苗的制备但目前对许多寄生虫的抗原表位蛋白分子免疫识别以及抗原抗体的相互作用尚缺乏足够的了解没有突破性的进展因此在研究手段上需要人们另辟蹊径自1975年单克隆抗体技术问世以来特别是在寄生虫研究中的应用使得猪囊虫的免疫诊断和预防都取得了重大的进展但由于其操作复杂效率低等缺点已无法满足现实需求

3、随着分子生物学和细胞生物学技术的研究进展抗体的研究已进入基因工程抗体时代九十年初抗体库技术特别是噬菌体抗体库技术的问世成为抗体革命中的突破性进展从此利用噬菌体表面展示技术制备人源化多功能化高亲和力的特异性抗体成为可能噬菌体抗体库技术是用PCR扩增出抗体的全套可变区基因将抗体分子DNA片段如Fab或单链抗体ScFv与噬菌体外壳蛋白基因P或P连接使融合蛋白表达于噬菌体颗粒的表面就形成了噬菌体抗体库经过吸附洗脱一扩增”过程富集筛选特异性抗体这一技术将抗体基因型与表型联系在一起,将抗体识

4、别抗原的能力和噬菌体扩增的能力结合在一起通过免疫亲和筛选直接得到特异的抗体基因可进一步进行基因工程改造因此噬菌体抗体库技术可以被认为是体内抗体生成过程的模拟首先建立足够多样性的抗体库然后通过免疫亲和筛选即可能得到针对任何抗原的抗体该技术省时省力无需经过杂交瘤甚至不经过免疫在制备人抗体方面显示无可比拟的优越性解决了传统的人杂交瘤系统低效的难题利用噬菌体抗体库技术还可能产生体内不存在的新的特异抗体该技术将抗体的基因在原核或真核系统表达可大规模制备抗体1997年澳大利亚的FOIey小

5、组[3]用噬菌体表面展示技术从鼠源性抗疟疾疫苗的侯选分子单链可变区片段ScFv测序获得了至少4个不同的ScFv基因序列为进一步研究AMA1的结构和功能奠定了基础1目前新疆农业大学硕士研究生论文Foley小组正在实验这些抗体片段在小鼠体内外对疟原虫感染中的保护作用并认为人源化的抗体能通过基因抗体工程菌大量廉价生产可用于今后疟疾的治疗和诊断人们预测噬菌体抗体库技术将逐步取代传统的杂交瘤技术生物技术领域极具应用前景2成为生产人单克隆抗体的主要手段在小鼠抗猪囊尾蚴单链噬菌体抗体库的构建文献综述

6、噬菌体抗体库技术及其研究进展随着分子生物学和细胞生物学技术的发展抗体的研究已进入基因工程抗体时代九十年代初抗体库技术特别是噬菌体抗体库技术的问世成为抗体制备技术的革命性突破标志着利用噬菌体表面展示技术制备人源化多功能化高亲和力特异性抗体成为可能噬菌体抗体库技术是用PCR扩增出抗体的全套可变区基因将抗体分子DNA片段如Fab或单链抗体ScFv与噬菌体外壳蛋白基因P或PV连接使融合蛋白表达于噬菌体颗粒的表面就形成了噬菌体抗体库经过吸附洗脱一扩增过程富集筛选特异性抗体这一技术将抗体

7、基因型与表型联系在一起将其识别抗原的能力和噬菌体的可扩增性统一起来较好的模拟了体内抗体产生的过程成为一种高效的筛选体系本文就应用丝状噬菌体展示系统构建噬菌体抗体库的原理方法及其研究进展进行综述一噬菌体展示技术系统用于蛋白质展示的系统主要有3种1.噬菌体展示系统2.噬粒展示系统3.细菌细胞表面展示系统其中以前两种系统较为成熟为大多数实验室采用构建噬菌体展示系统的噬菌体包括ë噬菌体T4噬菌体和丝状噬菌体目前广泛应用的是丝状噬菌体展示系统丝状噬菌体是单链DNA病毒PV和P分别是噬菌体颗

8、粒的主要表面衣壳蛋白和次要衣壳蛋白P位于噬菌体颗粒的一端每个颗粒约有35个拷贝噬菌体依靠P感染雄性大肠杆菌PV构成噬菌体颗粒的侧壁每个颗粒约有3000个拷贝噬菌体展示技术即是将编码外源肽或蛋白的DNA片段插入噬菌体或噬菌粒的基因组中然后以融合的形式与噬菌体的衣壳蛋白共同表达于噬菌体表面以利于配体的识别和结合而插入的DNA片段对噬菌体的生物学特性无大的影响[1]P和PV正是目前最常用的噬菌体融合蛋白P有两个位点可供外源DNA插入既N端和近N端可伸屈臂