β雌二醇对人卵巢癌细胞株HO8910 KLK6基因表达的调节

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1、β雌二醇对人卵巢癌细胞株HO8910KLK6基因表达的调节【摘要】目的：探讨17β雌二醇（17βE2）对雌激素受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶6（kallikrein6，KLK6）基因mRNA和蛋白表达以及细胞增殖的影响。方法：取对数生长期的HO8910细胞，加入不同浓度(1×10-7、1×10-8、1×10-9、1×10-10mol/L)的17βE2培养72?h后，收集细胞，分别采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应技术（RTPCR）和流式细胞术，检测KLK6mRNA和蛋白表达水平的变化，同时采用四甲基偶氮唑蓝（MTT

2、）比色法和流式细胞术检测细胞增殖活力和增殖周期的变化。结果：与乙醇对照组相比，不同浓度的17βE2使得KLK6基因mRNA和蛋白的表达明显上升（P<0.01），同时G0/G1期细胞百分率下降,S期和G2/M期细胞百分率升高,细胞增殖活力增强。结论：17βE2对KLK6mRNA和蛋白的表达具有上调作用，同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖。【关键词】卵巢肿瘤组织激肽释放酶类雌激素类ARoleofestrogenontheexpressionofKLK6inthehumanovariancancercelllineHO8910［ABSTRA

3、CT］Objective：ToinvestigatetheeffectsofestrogenontheexpressionofKLK6mRNAandproteininthehumanovariancancercelllineHO8910.Methods:HO8910cellswereincubatedwith17βE2atdifferentconcentration(1×10-7,1×10-8,1×10-9and1×10-10mol/L)for72hours.Thentheexpre

4、ssionlevelsofKLK6mRNAandproteinweremeasuredbyrealtimefluorensencequantitiveRTPCRandflowcytometry,respectively.Cellproliferationwasmeasuredby3(4,5dimethylthiazolzyl)2,5diphenytetrazoliumblue(MTT)colorimetricassay,andthecellcyclewasdetectedbyflowcytometry.Results:Comp

5、aredwiththeethanolcontrols,theexpressionofKLK6mRNAandproteinintheHO8910celllineaccompaniedbydifferentconcentrationsof17βE2increased(P<0.01)andthecellproliferationincreasedsignificantly，alsothecellpercentageoftheG0/G1phasedecreasedandthatoftheSphaseandtheG2/Mphaseincre

6、ased.Conclusion:EstrogenupregulatestheexpressionofKLK6mRNAandproteinandstimulatesHO8910cellproliferation.［KEYWORDS］Ovarianneoplasms;Tissuekallikreins;Estrogens人组织型激肽释放酶基因家族（kallikrein，KLK）位于人染色体19q13.313.4区域之间，共包括15个成员，编码一组具有丝氨酸蛋白酶活性的人组织型激肽释放酶（humankallikrein，hK）。研究发现KLK基因

7、家族各成员广泛表达于人体各种组织，在多种肿瘤中表达异常，是一类颇具潜力的肿瘤标志家族［1］。研究表明，KLK基因及其编码的系列蛋白参与肿瘤细胞生长的调控、肿瘤血管的形成和胞外基质的重建，可促进或抑制肿瘤的浸润转移，有望成为临床肿瘤治疗的新靶点［2］。KLK6是KLK基因家族成员之一，长约162?bp，编码的蛋白人组织性激肽释放酶6（humankallikrein6，hK6）是由223个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶，具有胰蛋白酶样活性。研究表明重组的hK6在体外能降解胞外基质蛋白，推测其可能在肿瘤的浸润中起作用［3］，目前KLK6参与肿瘤发生发展的

8、确切机理尚不清楚。鉴于KLK基因家族受类固醇激素调节的共同特点，本实验拟在建立检测KLK6mRNA实时荧光定量逆转录-聚合酶(RTPCR)链反应的基础上，探讨17