fsh、lh及雌二醇对人颗粒细胞nppc基因表达的影响

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文FSH、LH及雌二醇对人颗粒细胞NPPC基因表达的影响EffectsofFSH、LHandestrodialontheexpressionofNPPCgeneinhumangranulosecell课题来源：自由学位申请人王松导师姓名全松专业名称妇产科学培养类型科研型培养层次硕士所在学院第一临床学院2013年5月10日广州硕士学位论文FSH、LH及雌二醇对人颗粒细胞NPPC基因表达的影响硕士研究生：王松指导教师：全松摘要【研究背景】正常的减数分裂进程是保证种族延续的关键，是动物进化的根本保证。减

2、数分裂对卵母细胞生长和卵泡发育有着重要作用。卵母细胞的减数分裂进程不同于精母细胞分裂进程，它是由来源于卵母细胞自身和外源性的启动和停止信号所决定的。生殖细胞进入减数分裂后分别经历细线期、偶线期、粗线期，最终在出生前后被阻滞在双线期【1】。生殖细胞进入双线期以后，才能形成原始卵泡，原始卵泡库的形成决定生殖能力的大小。在人类和小鼠卵巢内，减数分裂从胚胎时期已经开始但停滞于第一次减数分裂双线期。哺乳动物窦状卵泡内完全发育成熟的卵母细胞一直停滞于减数分裂前期直至排卵前LH峰诱发第一次减数分裂恢复并诱导排卵。在生成并正确聚集那些能够驱使自

3、身恢复减数分裂进程的关键细胞周期调节分子后，停滞于减数分裂前I期的卵母细胞获得了减数分裂恢复的能力【2，3】。然而，尽管卵母细胞已经拥有已准备好的自身减数分裂途径，可卵泡间质细胞生成的某些因子仍然能够阻止其正常减数分裂的进行【4，5】。排卵前卵泡将卵母细胞维持在减数分裂停滞状态防止卵母细胞的过早成熟并以此保证卵母细胞胞浆和胞核同步化成熟以及卵母细胞分裂成熟与排卵行为的同步化【6]。在正常生殖周期中，下丘脑分泌排卵前LH峰刺激格拉夫卵泡内卵母细胞的减数分裂恢复并刺激排卵。然而，单独分离卵巢卵泡内卵母细胞并在简单的营养支持培养条件下

4、进行体外培养，虽然没有激素的刺激支持，可卵母细胞却能够自发恢复减数分裂【7】。生发泡的破裂是卵母细胞减数分裂恢复摘要的第一个明显的形态学标志。1935年，研究者在体外培养家兔和人类卵母细胞实验中首次观察到卵母细胞自发的生发泡破裂，并提出这一观点：从剩余的卵泡组织中分离出COC复合物造成卵泡内的减数分裂抑制因子与复合物的分离从而导致了COCs减数分裂的自发恢复[7]。随后在其他哺乳动物研究中也相继观察到了卵母细胞在体外培养中出现的白发生发泡破裂即减数分裂恢复现象【8]。卵母细胞需要持续稳定升高的cAMP来维持GV期卵母细胞减数分裂

5、的抑制状态【9，101。PDE3A，卵母细胞内的特异性磷酸二酯酶，在LH峰后激活，水解卵母细胞内cAMP继而激活生长刺激蛋白并启动减数分裂恢复信号通路，导致随后的卵母细胞生发泡破裂【11．13]。在LH峰前，卵丘细胞所产生的cGMP通过缝隙连接转移至卵母细胞内，抑制卵母细胞内PDE3A活性从而阻止卵母细胞内cAMP的下降和GVBD的发生[14，15]。NPPC是一种由22个氨基酸构成的小分子多肽，在格拉夫卵泡内表达于排列在卵泡壁周围的壁层颗粒细胞上，而它的同源受体鸟苷酰环化酶NPR2则大部分表达于环绕于卵母细胞周围的卵丘细胞上【

6、16】。卵泡壁层颗粒细胞内NPPC作用于卵丘细胞上NPR2受体，刺激卵丘细胞产生cGMP。将格拉夫卵泡内的COCs复合物分离出来与之共培养可以升高卵丘细胞和卵母细胞内的cGMP含量，阻止GVB。有研究表明，NPPC或者NPR功能缺失小鼠或者基因敲除小鼠中卵母细胞出现早发的减数分裂恢复，证实了NPPC以及其同源受体NPR2在维持减数分裂抑制中的重要作用【16]。研究发现NPPC和它的同源受体NPR2并认为该信号系统在女性生殖系统中发挥重要作用，在减数分裂停滞状态维持中其重要作用后，Takehito便通过研究NPPC基因缺失及NPR

7、基因变异鼠内卵泡和卵母细胞的超微结构形态，来探索生殖系统中NPPC／NPR缺乏所造成的生物学缺陷[171。该研究者在实验中发现，NPR缺陷小鼠排卵数量类似与正常小鼠，但所获得的卵母细胞从未排除第一极体，所有NPR／NPPC缺陷鼠排出的卵母细胞内均存在生物学缺陷，如碎片状或硕士学位论文者变性退化的细胞质，并且即使受精后也无法发育至2细胞阶段。组织学观察卵巢发现NPR2以及NPPC缺陷鼠窦状卵泡内卵母细胞发生提前减数分裂恢复，部分窦状卵泡内的卵母和排卵前收集的卵母细胞内均表现出排列紊乱的染色体或者杂乱的染色质。基因敲除鼠排卵后的卵母

8、细胞和排卵期卵泡内的卵母细胞均无卵丘细胞包绕，这些研究发现表明NPPC／NPR信号系统对卵母细胞减数分裂停滞状态和卵丘冠状物形成有着重要作用，并通过影响产生拥有发育潜能的卵母细胞来影响着女性生殖力。小鼠COCs体外培养证实，体外培养过程中雌激素可以刺激并稳定NP