鹅fsh-α基因mrna表达规律及原核表达研究

《鹅fsh-α基因mrna表达规律及原核表达研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、甄霆鹅FSH．Q基因mRNA表达规律及原核表达研究鹅FSH．Q基因mRNA表达规律及原核表达研究摘要鹅的繁殖力低下一直是困扰鹅产业发展的关键问题，其核心在于鹅节律性排卵周期长，且具有间隙期。促卵泡激素(FSH)作为调节家禽卵泡发育重要的候选基因，越来越多研究表明，FSH在家禽体内主要促进次成熟卵泡合成孕酮，作用于小卵泡促进雌激素大量生成，从而促使卵泡发育成熟。本研究在探讨促卵泡激素(FSH)基因及其负反馈调节基因卵泡抑制素(小m)共同在鹅生殖周期内表达变化规律基础上，深入阐明FSH在调控鹅产蛋过程中的作用。同时利用融合PCR技术，将具有延长基因半衰期作用的CTP序列添加到鹅FSH基因

2、各亚基的C末端进行基因融合，通过构建原核表达载体，获得了pET32a-FSHQ．CTP、pET32a-FSH13．CTP和pET32a-FSH13-CTP．Q重组蛋白，以期为开发出鹅rFSH生物制剂奠定基础，也为提高鹅产蛋量提供依据。采用RT．PCR和RT．qPCR技术检测FSH．Ⅱ、INH-Ⅱ在鹅的不同组织中以及不同生殖时期的mRNA表达量。结果表明，鹅FSH．Q和INH．Q基因mRNA在心、肝、脾、下丘脑、肾、大肠、小肠、大脑、小脑、输卵管、腺胃、垂体、肺、卵巢和胸肌等组织中均有不同程度的表达，且在垂体、卵巢等生殖相关组织中表达较高。不同生殖时期的mRNA表达量检测发现，FSH．

3、Q基因表达量在产蛋期(排卵前)达到顶峰，显著高于另外三个时期(开产前期、产蛋期(排卵后)、抱窝期)；INH．Q基因表达量表现出与FSH-Q相反的趋势，在产蛋期(排卵前)达到最低值，研究揭示了鹅FSH．Q和INH．Ⅱ基因在鹅不同生殖时期的变化规律。根据NCBI上公布的鹅FSH基因序列和原核表达载体pET32a的特点，设计了去除目的基因信号肽和含有酶切位点的特异性引物，经融合PCR扩增获得了目的基因FSHQ．CTP、FSHB．CTP和FSH0．CTP．Q，通过构建原核表达载体pET32a-FSH12．．CTP、pET32a-FSH13．CTP和pET32a-FSH13．CTP．a，将重组

4、质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导，SDS．PAGE检测，蛋白纯化。结果表明，三个融合蛋白FSHⅡ．CTP、FSHB．CTP和FSH13．CTP．Q的IPTG最佳诱导时间分别为4h、5h和5h，最佳诱导浓度分别为0．2mmol／L、0．8mmol／L和1．5mmol／L，且都是以包涵体形式存在，分子量分别为32KD、35KD和46KD，与预期大小一致。研究结果为开展鹅FSH的基因免疫研究和鹅rFSH生物制剂研发奠定基础。关键词：鹅；FSH基因；融合PCR；原核表达Ⅱ扬州大学硕士学位论文mRNAexpressionandprokaryoticexpressionst

5、udyofgooseFSH—QgeneAbstractThelowefficiencyofreproductivecapacityisthekeyproblemingooseproductionindustry，嬲theovulatorycycleofgooseisalongtimewhichhaSclearanceperiod嬲well．Follicle-stimulatinghormone(FSH)isthemaincandidategenethatregulatingthegrowthofavianfollicle．Moreandmoreevidencesdemonstrate

6、dthatFSHinducedthesynthesisofpregnendionebysecondmaturefollicles，playingaroleonthesmallfollicleswhichinducingthesynthesisofestrogen，andthenpromotingthematurationoffollicle．AccordingtothechangerulesofexpressionofFSHgeneanditsnegativeregulatorINHgeneingoosereproductioncycle，werevealedtheregulatef

7、unctionofFSHintheprocessofgooseegglayinginthisresearch．Otherwise，inordertodevelopbiologicsofgooserFSHandincreasetheeggproductionofgoose，weinsertedtheCTPsequencewhichcouldprolongthehalf-lifeofgeneintotheendofeachFSHsubunitsequenceb