as2o3诱导人卵巢癌细胞株ho8910凋亡和端粒酶活性的关系

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1、As2O3诱导人卵巢癌细胞株HO8910凋亡和端粒酶活性的关系：张少华，高尚风，郝志明，王英【摘要】目的探讨As2O3诱导HO8910细胞凋亡和端粒酶活性变化的关系。方法用不同浓度的As2O3溶液作用卵巢癌细胞株HO8910，于不同时间点收集细胞，MTT法检测细胞生长抑制率；FCM检测细胞凋亡率；TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果As2O3溶液对HO8910有生长抑制和诱导凋亡的作用，与药物浓度和作用时间相关。不同浓度As2O3作用HO8910细胞，其端粒酶活性在24h无明显改变，随着作用时间的延长，端粒酶活性逐渐下降，随

2、着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势，以致消失。结论As2O3可以诱导卵巢癌细胞株HO8910发生凋亡，其机制可能不是通过端粒酶活性下降直接调控的，但端粒酶调控与凋亡调控有一定相关性。【关键词】三氧化二砷；人卵巢癌细胞；细胞凋亡；端粒酶活性ABSTRACT:ObjectiveToexploretherelationshipbeteraseactivityandapoptosisbyarsenictrioxideinovariancarcinomacelllineHO8910.MethodsTT)assaytoevaluate

3、theeffectofAs2O3.Thepercentageofapoptosisetry(FCM).TelomeraseactivityofovariancarcinomacellsinedbythemethodofTRAP-PAGEargentation.ResultsGroe-andconcentration-dependentmanner.TT法、流式细胞仪检测、TRAP-银染法等先进的技术，探索As2O3诱导卵巢癌细胞凋亡的机制以及细胞凋亡与端粒酶活性之间的关系。1材料与方法1.1材料与引物人卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8

4、910由第四军医大学妇产科实验室惠赠。人宫颈癌Hela细胞购自西安交通大学第一附属医院泌尿外科实验室，人胚肺成纤维细胞HFL-I购自中国科学院上海细胞所。As2O3为哈尔滨伊达药业公司产品，配制成15mmol/LAs2O3储存液，过滤除菌后，-20℃保存。使用前用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液稀释至工作浓度。DMEM培养基为美国GIBCO公司产品。AnnexinⅤ-FITC试剂盒购自晶美生物工程有限公司。CHAPS购于Sigma公司。TaqDNA多聚酶购于Promega公司。RNasin购自华美生物工程公司。引物设计与合

5、成：由上海生物工程公司合成，引物序列为TS引物：5′-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3′；NT引物：5′-ATCGCTTCTCGGCCTTTT-3′；ACX引物：5′-GCGCGGCTTACCCTTACCCTTACCCTAACC-3′；TSNT引物：5′-AATCCGTCGAGCAGAGTTAAAAGGCCGAGAAGCGAT-3′。1.2方法1.2.1细胞培养三种细胞常规培养在高糖型DMEM培养基中，培养条件为37℃，50mL/LCO2饱和湿度，待细胞长满瓶底时，2.5g/L胰酶消化成单个细胞继续传代。1.2.2活细胞观

6、察按1×105/mL细胞悬液接种HO8910细胞于50mL培养瓶中，分为实验组和对照组，实验组细胞用不同浓度As2O3处理，于处理24、48、72h后用倒置显微镜观察实验组和对照组细胞的形态变化。1.2.3MTT法测定细胞生长抑制率取对数生长期HO8910细胞，按6×103/孔的密度接种于96孔培养板，24h后，实验组分别加入As2O3溶液使其终浓度达到工作浓度，每个浓度组设3个复孔，以加入不含药物的细胞培养液组为空白对照组，将各组细胞继续培养24、48、72h后，以MTT法测定活细胞数，取3孔均值。细胞的生长抑制率＝(1-实验组

7、A值/对照组A值)×100%，重复上述实验5次，取其均值。1.2.4流式细胞仪定量检测细胞凋亡率将含5×105/mL细胞数的HO8910细胞悬液接种于50mL培养瓶中，细胞贴壁后，实验组加入不同浓度的As2O3，平行对照组不加药物，于24、48、72h后，收集各浓度组的HO8910细胞，制备成单细胞悬液，用4℃预冷的PBS(pH7.4)洗涤2遍，用250μL结合缓冲液(bindingbuffer)重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/mL，取100μL的细胞悬液于5mL流式管中，加入5μLAnnexinⅤ/FITC和10μL20m

8、g/L的碘化丙锭(propidiumiodide)溶液，混匀后于室温避光孵育15min，在反应管中加300μL结合缓冲液(bindingbuffer)，流式细胞仪检测，测试完毕用ModiFit软件进行数据分析。实验重复4次。1.2.5TRAP-银染