人卵巢癌细胞建系与和dc融合诱导ctl活性的研究

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1、摘要目的从人卵巢癌组织建立卵巢癌细胞系，以研究卵巢癌细胞的生物学特性，并探讨卵巢癌细胞与树突状细胞的融合疫苗在体外抗肿瘤的免疫反应。方法取手术切除的卵巢癌组织，进行组织块培养，待长满90％汇合面后消化传代培养，并进行卵巢癌细胞形态学、生长动力学、裸鼠致瘤性及免疫组化等生物学特性研究；用PEG法将卵巢癌细胞与树突状细胞融合，在含10％FCS，GM—CSF、IL一4的RPMI一1640条件下培养7d，然后与CA一125特异性T细胞共培养24hr，用细胞内染色法、MTT法及流式细胞术分析检测融合细胞诱导CTL的活性。结果该卵巢癌细胞系己在体外培养生存20个月，传90余代，

2、命名为湖南卵巢癌细胞系1号(HOCl)，其生物学特性显示：该细胞系体外生长的倍增时间为47．2h,软琼脂集落形成率为18．5％；接种至裸鼠后具100％致瘤性；染色体核型分析为非整倍体，众数为74～92条；透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面含有丰富的微绒毛，胞浆内含有丰富的核糖体，具有卵巢癌细胞的恶性表型。卵巢癌细胞与自体或同种异体Dc融合后既能表达CA一125卵巢癌相关抗原，又能表达MHCI、MHCII、B7—1及B7—2等DC相关分子，融合的杂交细胞能在体外诱导CTL活性。结论该卵巢癌细胞系经体外长期培养并传90多代后已形成永生化癌细胞系，并具有明显的恶性表型特征。

3、卵巢癌细胞与自体或异体树突状细胞的融合疫苗能在体外诱导抗卵巢癌CTL活性。关键词卵巢癌，细胞系，细胞融合，肿瘤免疫，人类ABSTRACTobjectivesToestablishanovariancarcinomacelllinefromhumanovariancarcinomasurgicalspecimen，whichprovideareliabledataforstudyingmechanismofflaringupandsiftingthroughtmedicineoftreatingovariancarcinomaandexplorertheeffecto

4、factivationofanti-tumorcytotoxicTlymphocytesinvitrobyfusionofhumanovarianCarcinomaCellswithautologousorallogeneicdendriticCells．MethodsTheexplantsfromhumanovariancarcinomabiopsieswereculturedincompleteRPMI一1640mediacontmnning10％FCS，GM-CSF、IL一4．Aftergrowingto90％confluence．thecellsweredi

5、gestedforsubculture，whosecharacteristics，includingmorphology,growthkinetic，tumorigenecityinnudemiceandimmuno—histochemistrywerestudied．ThehumandendriticcellsandovarianCarcinomacellswerefusedbyPEG，andwerecultivatedincompleteRPMI一1640mediacontaining10％FCS，IL一4、GM—CSFfor7daysandthenCO—cul

6、turefusioncellswithCA一125SpecificTcells．Theactivationofanti—tumorCTLelicitedbythefusioncellsweredetectedbyintracellularcytokinestaining，MTTstainingandFlowCytometricAnalysis．ResultsThiscelllinehasbeenpassagedmorethan90timeswithin20monthsanddesignedHOCl(HumanOvarianCarcinomacellline)．The

7、BiologicalCharacteristicsofHOCldemonstrated：Thepopulationdoublingtimecalculatedinthelogphaseofgrowthwas47．2h；ⅡIThecloningefficiencyinsoftagaraveraged18．5％；Theovariancarcinomacellshavehightumorigencityinnudemice；Karyo-typeanalysisshowedaneuploidywiththemodalchromosomalnumber74“92；Unde