大蒜素诱导卵巢癌耐顺铂细胞株skov-3ddp凋亡机制研究

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1、南昌大学硕士学位论文大蒜素诱导卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV--3/DDP凋亡机制研究姓名：梁笑倾申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：谭布珍201205摘要目的：研究大蒜素作用于卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3／DDP后P53、Bax、Bcl．2等凋亡相关基因表达变化，探索大蒜素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：将SKoV-3／DDP细胞随机分为对照组、大蒜素组、顺铂组和大蒜素+顺铂组；大蒜素组仅加入浓度为40ug／ml的大蒜素，顺铂组加入浓度为40ug／ml的顺铂，大蒜素+顺铂组加入大蒜素和顺铂各40ug／ml，各组分别培养24h、48

2、h。用MTT法测定各组细胞增殖抑制率，利用金氏公式计算两药的合用指数(q)分析两药联合应用的效果：q=E(AB)／[EA+(1一EA)×EB]，其中E(AB)为两药合用的抑制率，EA和EB为各药单用时的抑制率，q=0．85～1．15表示两药作用相加；q>1．15表示两药作用协同：q<0．85表示两药作用拮抗【¨。RT-PCR方法观察各组基因P53、Bax、Bcl．2mRNA的表达，Westernblot法观察各组P53、Bax、Bcl．2蛋白表达变化。结果：1、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组对SKOV-3／DDP细胞生长均有抑制作用

3、，与空白对照组相比有统计学意义(P

4、别为1．16；48小时后合用指数分别为0．85；根据金氏公式可以推测，两药合用24小时后的作用效果表现为协同作用；两药合用48小时后的作用效果表现为相加作用。2、顺铂组促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义fP>O．05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因P53mRNA及蛋白的表达高于顺铂组、空白对照组(P0．05)。摘要3、大蒜素组、顺铂组、大蒜素+顺铂组促凋亡基因BaxmRNA及蛋白表达较空白对照组明显增加(P

5、<0．05)，大蒜素组BaxmRNA及蛋白表达高于顺铂组fP<0．05)，大蒜素+顺铂组对BaxmRNA及蛋白表达高于其各自单用时BaxmRNA及蛋白表达口<0．05)。4、顺铂组抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表达与空白对照组相比无统计学意义(P>0．05)，大蒜素组、大蒜素+顺铂组Bcl．2mRNA及蛋白表达量较顺铂组、空白对照组明显降低(P<0．05)，大蒜素+顺铂组BaxmRNA及蛋白表达低于大蒜素组(P

6、抑制作用强于顺铂。大蒜素和顺铂间有协同／相加作用。2、大蒜素作用于SKOV-3／DDP细胞后，促凋亡基因P53、BaxmRNA及蛋白的表达增高，而抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表达降低，且优于顺铂。大蒜素与顺铂联合作用SKOV-3／DDP后促凋亡基因P53、BaxmRNA及蛋白的表达增高，和抑凋亡基因Bcl．2mRNA及蛋白的表达降低较各自单用组明显。3、大蒜素组促凋亡基因P53mRNA和蛋白表达量增多，伴随着促凋亡基因BaxmRNA和蛋白有显著性增高。表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是先诱导P53mRNA和蛋白表达，通过P53基

7、因进一步诱导BaxmRNA和蛋白表达，发挥连锁凋亡激活效应。4、大蒜素组Bax蛋白显著性增高，同时伴Bcl．2蛋白表达量减低，表明大蒜素诱导细胞凋亡机制可能是通过升高Bax蛋白，下调Bcl．2蛋白，从而促进SKOV-3／DDP细胞凋亡。总之，大蒜素对SKOV-3／DDP细胞生长有抑制作用，诱导SKOV-3／DDP细胞凋亡可能与促进P53、Bax的表达增高、Bcl．2的表达降低有关。关键词：大蒜素；顺铂：卵巢癌：基因表达；SKOV-3／DDP；凋亡IIIAbstractABSTRACTObjective：ToinvestigateP53

8、，BaxandBcl-2andotherapoptosis-relatedgeneexpressionchangesofovariancancercisplatin-resistantcelllinesSKOV-3／DD