那可丁联合顺铂诱导卵巢癌细胞株skov-3增殖抑制的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文那可丁联合顺铂诱导卵巢癌细胞株SKOV--3增殖抑制的研究姓名：秦金金申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：程建新201203中文摘要那可丁联合顺铂诱导卵巢癌细胞株SKOV-3增殖抑制的研究摘要目的：卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，严重危害女性的生命健康。目前，除手术治疗外，化疗为主要的辅助治疗手段。那可丁是一种无毒苄基异喹啉类生物碱，一直以来作为镇咳药使用。近年来，研究证实，那可丁可作用于微管，抑制其动态不稳定性，干扰肿瘤细胞有丝分裂的进程，抑制肿瘤细胞生长。那可丁在肿瘤细胞和动物肿瘤模型的实验研究中均表现出良好的抗肿瘤

2、活性，有望成为治疗卵巢癌的新型微管蛋白抑制剂。本实验主要研究那可丁对人卵巢癌细胞株SKOV．3的增殖抑制作用作用，并探讨其机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株SKOV．3，以相同浓度种植于96孔板中培养，在含10％胎牛血清的RPMI一1640培养基中，置37。C、C02含量5％的孵育箱孵育24小时后，给予含5，10，20，40，80，160pmol／L浓度的那可丁，分别再孵育24、48、72小时后取出，用MTT比色法检测细胞增殖情况；用20，40umol／L浓度的那可丁、10ug／ml的顺铂及那可丁联合顺铂作用于SKOV一3细胞，孵育24、48、72小时，用

3、倒置显徽镜观察那可丁、顺铂及那可丁联合顺铂对细胞形态的影响，然后用流式细胞术(flowcytometryFCM)检测那可丁、顺铂及那可丁联合顺铂对细胞周期的影响；流式细胞术检测那可丁、顺铂及那可丁联合顺铂对aurora．A蛋白表达的影响。统计学处理用SPSSl7．0软件完成，计量资料数据表示方式以平均值±标准差(Mean±SD)，多组比较采用单因素方差分析，组问比较采用LSD—t检验，以P<0．05为差异有统计学意义。结果：1那可丁对SKOV一3细胞增殖抑制的影响：5、10、20、40、80lamol／L那可丁作用SKOV．3细胞24小时细胞的存活率分别为

4、88．27±11．71％、82．89+14．13％、67．97±15．3％、39．41±12．28％、38．45±7．86％，作用SKOV．3细胞48小时细胞的存活率分别为84．56±9．36％、79．03±13．37中文摘要％、62．18±9．90％、23．49±9．34％、11．90±2．64％，作用SKOV．3细胞72小时细胞的存活率分别为82．40±8．21％、73．54±12．05％、59．38±4．22％、11．I7±3．63％、07．78±1．34％，各组之间比较，差异有统计学意义fP

5、均呈现下降趋势，数据表明，那可丁对SKOV．3细胞的增殖的抑制有明显的量效关系和时效关系。2SKOV．3细胞的形态学观察：经过那可丁40lamol／L、顺铂l0lag／ml及那可丁联合顺铂作用48h后，倒置显微镜下观察，对照组细胞排布紧密，贴壁生长，细胞菱形或梭形，细胞透明，生长状态良好，细胞间界限清楚，细胞核隐约可见。那可丁作用后可见到部分细胞皱缩，破裂，脱落呈悬浮状，细胞间连接减少，呈现细胞生长抑制的形态学变化，那可丁和顺铂联合作用后细胞出现的上述形态学变化更为明显。3流式细胞仪检测SKOV．3细胞周期：药物作用48h后，对照组的SKOV．3细胞的G1

6、期和G2期细胞数分别为64．77±4．97％和16．87±2．65％；20、40lamol／L那可丁作用48小时后SKOV．3细胞的Gl期和G2期的细胞数分别为50．73±2．66％，31．77±9．38％和22．53±2．53％，32．00±1．80％。20、40pmol／L那可丁联合l0pg／ml顺铂作用SKOV．3细胞48小时后的Gl期和G2期的细胞数分别为27．47±5．77％，6．55±3．59％和37．17±6．66％，55．10±6．36％。实验表明，那可丁可使SKOV一3细胞周期停滞在G2／M期。4流式细胞分析技术检测aurora．A蛋白表

7、达：药物作用48h后，与对照组相比，20、40umol／L那可丁作用于SKOV一3细胞48h后，aurora．A的荧光指数(FI)为1．047±0．030、1．089±O．039，20、40lamol／L那可丁联合10ug／mL顺铂作用于SKOV．3细胞48h后，aurora．A的荧光指数(FI)为1．120±0．036、1．160±0．054；与对照组相比，20、40pmol／L那可丁作用于SKOV．3细胞48h后，随浓度增加，那可丁作用于SKOV一3细胞后aurora．A蛋白的荧光指数升高。那可丁联合顺铂与单独用药相比，aurora．A蛋白的荧光指数更

8、高。且差异有统计学意义(P<0．05)。结论：1那可丁具有明显抑制