干细胞移植联合顺铂化疗抑制卵巢癌细胞SKOV-3体外增殖、侵袭能力和体内肿瘤生长的研究.pdf

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1、中国妇幼保健2013年第28卷干细胞移植联合顺铂化疗抑制卵巢癌细胞SKOV一3体外增殖、侵袭能力和体内肿瘤生长的研究刘丽黎渊明刘琴张亚光毛圆圆江苏省昆山市第一人民医院妇产科215300中国图书分类号R711．75文献标识码A文章编号1001-4411(2013)32-5354-04；doi：10．7620／zgfybj．j．issn．1001—4411．2013．28．37【摘要】目的：探讨脐带问充质干细胞(huMSCs)和脐血造血干细胞(HSC)联合顺铂(DDP)对卵巢癌细胞SKOV一3抑制作用的研究。方法：①体外实验：huMSCs、HS

2、C、huMSCs+HSC与DDP作用的SKOV一3非接触式共培养，流式细胞仪分析SKOV一3增殖和凋亡情况；Transwell实验评估SKOV一3侵袭能力。②体内实验：建立裸鼠卵巢癌细胞SKOV一3皮下移植瘤模型，观察干细胞移植联合顺铂对移植瘤的影响，并对荧光标记的huMSCs进行示踪。结果：①体外实验结果表明，干细胞联合DDP，能够促进SKOV一3凋亡并抑制其侵袭。②体内实验结果显示，干细胞移植联合DDP治疗能够显著抑制移植瘤的生长，且huMSCs+HSC+DDP组抑制效果最好。干细胞示踪结果显示，huMSCs具有趋瘤性。结论：huMSC

3、s和HSC移植可以增强DDP对SKOV一3增殖和侵袭的抑制作用，huMSCs和HSC移植联合DDP化疗能够有效的抑制移植瘤在裸鼠体内的生长。【关键词】干细胞顺铂卵巢癌增殖侵袭干细胞是一类具有自我更新和复制能力的原始细于含10％FBS的RPMI1640培养基中，37oC、5％胞，具有多向分化潜能，同时还可以分泌多种细胞因CO培养箱中常规传代培养。子，参与机体的免疫调节⋯，干细胞具备多种优势，1．2．2MTF法检测不同浓度的顺铂对卵巢癌细胞因此被广泛地应用于难治性疾病的研究当中。造血干SKOV一3增殖的影响对数生长期的卵巢癌细胞细胞(HSC)目

4、前已广泛应用于临床医学，主要治疗SKOV一3以1×10个细胞／mL浓度接种于96孔细胞血液系统疾病叫。而人脐带间充质干细胞(huM—培养板上，常规培养12h。分别加入顺铂终浓度分别SCs)具有免疫原性低、迁移能力强、采集简单、不为0．8、1．6、3．1、6．2、12．5、25、50和100M的涉及伦理问题，并且可以在体外扩增等特点，逐渐成培养基(100l／／孔)作为实验组，阴性对照组加正常为临床使用的间充质干细胞的重要来源，被广泛用于培养液(100l／／孔)，每组6个复孔，实验重复3组织损伤和自身免疫病的研究]。近期有报道证次。另外，设仅加

5、培养液的空白孑L以调零。明，huMSCs对卵巢癌细胞具有趋向作用，这为干细上述药物处理的细胞在37℃、5％CO培养箱中胞可能用于治疗卵巢癌提供了科学依据J。本文通过继续培养48h后，每孔加入20IxlMTT／PBS溶液huMSCs和HSC联合顺铂(DDP)处理卵巢癌细胞(5mg／m1)继续培养4h，弃上清，每孔加入100lSKOV一3，在体内和体外观察其对肿瘤细胞的影响，二甲基亚砜(DMSO)，振荡10min，置酶标仪测定初步探讨huMSCs和HSC联合顺铂的抗肿瘤作用，以570nm波长处各孑L的吸光度值，计算细胞的存活率。期为临床治疗卵巢

6、癌提供新的思路。1．2．3干细胞非接触式共培养联合顺铂对卵巢癌细胞SKOV一3凋亡的影响huMSCs和HSC分别用含1材料和方法10％FBS的RPMI1640培养基调整细胞密度为1．1材料huMSCs、HSC和细胞膜荧光染色试剂1×10个／ml和2．5X10个／ml备用。以0．5XICsn浓DiI标记的huMSCs由江苏省干细胞库研发部惠赠；度的Jl~~A处理卵巢癌细胞48h，消化后收集计数，以人卵巢癌细胞株SKOV一3购于中国科学院上海细胞含10％FBS的RPMI1640培养基调整细胞密度为库。MatrigelMatrix和Transwe

7、ll小室购自BD公司；1X10个／ml，接种于24孔板中每孔0．5ml，将滤膜DDP购自Acros公司；碘化丙啶(PI)、MTF和细胞孔径为3m的Tranwell小室置于对应的24孔板孔凋亡检测试剂盒(AnnexinV—FITC／PI双染细胞凋亡上，并向小室中加入相应的干细胞悬液共培养。根据检测试剂盒)购买自Invitrogen公司；培养板等细胞小室上层溶液的不同分组：①Control(DDP)：培养耗材购自CORING公司；RPMI1640培养基、胎0．2ml培养基；@huMSCs+DDP：0．2mlhuMSCs细牛血清(FBS)购自GI

8、BCO公司。BALB／c雌性裸鼠胞悬液；③HSC+DDP：0．2mlHSC细胞悬液；④购自第二军医大学，6周龄，体重约20g。huMSCs+HSC+DDP：0．1mlhuMSCs