rna干扰plcε诱导人膀胱癌细胞株凋亡实验的研究

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2、aydoubledistilledwaterdiethylpyrocarbonatedimethylsulphoxidedeoxyribonucleicaciddithiothreitolEthidiumBromideethylendiaminotemaceticacidfetalcalfscrtlnlFlowcytometryhourmonoclonalantibodyminutemessengerribonucleicacidNuclearfactorkappaBopticaldensitypolyacrylamidegele

3、leelrophoresisphosphatebufferedsalinepolymerasechainreactionployvinylidenefluoridaroundsperminuterooseveltparkmemorialinstituerevel"setranscriptionPCRRNAinterferencesinailinterferenceRNAshorthairpinRNAsecondTaqDNApolymerasetransitionalcellcarcinomaofthebladderN，N，N’，N

4、—tetramethylethylenediamineTri(shydroxymethy)aminomethanephycoerythin7．aminoactinomycinD中文全称B细胞淋巴瘤／白血病2碱基对互补脱氧核糖核酸编码区二甲基联苯胺天双蒸水焦碳酸二乙脂二甲基亚砜脱氧核糖核酸二硫苏糖醇溴化乙锭乙二胺四乙酸胎牛血清流式细胞术小时单克隆抗体分钟信使核糖核酸核因子心光密度聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链反应聚偏二氟乙烯每分钟转数RPMll640培养基逆转录聚合酶链反应RNA干扰小片段干扰RNA小片段发夹状RNA秒嗜热D

5、NA聚合酶膀胱移行细胞癌四甲基乙二胺三羟甲基氨基甲烷藻红蛋白7．氨基放线菌素D重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．学位论文作者签名：垄垦整日期：学位论文版权使用授权书本人完全

6、了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印，缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期：起鹰幺、重庆医科大学硕士研究生学位论文RNA干扰PLCe诱导人膀胱癌细胞株凋亡的实验研究摘要第一部分PLCe特异性shRNA真核表达载体的构建和鉴定目的：构

7、建人源PLCs基因编码区的短发夹状shRNA真核表达质粒载体。方法：I．设计合成针对PLCs基因的shRNA与具有荧光蛋白表达的r_‘pGenesil-1质粒连接，构建的重组质粒分别命名为阳性质粒pGenesil-PLCsl、pGenesil—PLCe2和阴性质粒pGenesil-NP；2．重组质粒体外转染T24、BIU-87细胞后用荧光显微镜观察重组质粒的绿色荧光强度，判断最佳转染时间及质粒与脂质体比例；3．用RT-PCR和Westemblot检测转染重组质粒前后T24、BIU-87细胞PLCe的表达变化。结果：1．经凝胶电泳、

8、DNA测序分析，成功构建PLCg特异性shRNA重组质粒pGenesil-PLCsl、pGenesil-PLCe2及pGenesil-NP；2．用荧光显微镜观察发现重组质粒转染48h，质粒与脂质体比例为1：2时细胞荧光强度最强；3．RT-PCR和W