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时间:2018-12-01
《uhrf1 基因在人卵巢癌细胞株ovcar-3 中的表达及意义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3中的表达及意义周碧芳邓斐周学惠吴强江苏省肿瘤医院妇瘤科210009【摘要】目的探讨UHRF1基因在人卵巢癌细胞株OVCAR-3中的表达及其生物学意义。方法利用小干扰RNA基因沉默技术,将体外化学合成的针对UHRF1基因的siRNA转染至人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞;实时荧光定量PCR和Westernblot分别检测转染前后细胞UHRF1mRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8实验和流式细胞术分别检测沉默UHRF1基因后对细胞增殖和凋亡的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示
2、,siRNA转染后UHRF1基因在卵巢癌细胞株OVCAR-3中表达显著降低(P<0.01);Westernblot结果显示,siRNA转染后,转染组、阴性对照组和空白组细胞UHRF1蛋白表达量与β-actin蛋白表达量相对比分别为0.16±0.04、0.33±0.03、0.35±0.07。转染组细胞UHRF1蛋白表达水平低于阴性对照组和空白组,差异具有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组和空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05);CCK-8实验和流式细胞术结果表明,UHRF1基因沉默后对细胞增殖产生了抑制作用,
3、表现为在转染的第二天、第三天和第四天,转染组细胞增殖率都要低于空白组,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。同时,抑制UHRF1基因的表达可以促进细胞的凋亡,转染组、阴性对照组和空白组细胞的凋亡率分别为(64.97±2.22)%、(28.57±2.93)%、(27.75±1.07)%,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论利用小干扰RNA基因沉默技术,UHRF1基因沉默后可以显著抑制卵巢癌OVCAR-3细胞UHRF1的表达,这为研究UHRF1基因作为卵巢癌新的诊断和治疗的靶标提供了基础和依据。【关键词】UHRF1
4、基因;卵巢癌;OVCAR-3细胞株;RNA干扰ExpressionofUHRF1inovariancancercelllineOVCAR-3anditssignificanceZhouBifang,DengFei,ZhouXuehui,WuQiangDepartmentofGynecologicalOncology,CancerHospitalofJiangsuProvince,Nanjing210009,China.【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofUHRF
5、1geneinhumanovariancancercelllineOVCAR-3anditsbiologicalsignificance.MethodsUsingthesiRNAgenesilencingtechnique,chemicalsynthesissmallinterferingRNAforUHRF1genesequenceweretransfectedintothehumanovariancancercelllineOVCAR-3;Real-timequantitativePCRandWesternblot
6、assayseparatelywasusedtocomparethemRNAandproteinlevelofUHRF1beforeandaftersiRNAtransfection;CCK-8assayandflowcytometrywereusedtoinvestigatethecellproliferationandcellapoptosisafterUHRF1genesilencing.ResultsAstheReal-timequantitativePCRresultsshown,theexpressiono
7、fUHRF1wassignificantlydecreasedinthecellsofOVCAR-3afterthetransfectionofsiRNA(P<0.01);AstheWesternblotresultsshown,therelativeexpressionbetweentheUHRF1proteinandtheβ-actinproteinintransfectiongroup,negativecontrolgroupandblankgrouprespectivelywas0.16±0.04,0.33±0
8、.03and0.35±0.07.TheUHRF1proteinlevelintransfectiongroupwaslowerthannegativecontrolgroupandblankgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).However,compared
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